一株纳豆芽孢杆菌的产酶条件优化

李 妍，吴庆红，陈义伦,*，周 波*

(1.山东农业大学食品科学与工程学院，山东 泰安 271018；2.泰山学院附属中学，山东 泰安 271018；3.土肥资源高效利用国家工程实验室，山东农业大学生命科学学院，山东 泰安 271018)

血栓病威胁着人类的健康与生命，溶解血栓是治疗这类疾病的首选方法；当前的溶栓剂，如尿激酶、链激酶、重组组织型纤溶酶原激活剂等，存在半衰期短、副作用大、价格昂贵等缺点[1-3]。纳豆激酶(nattokinase，NK)是一种在纳豆发酵过程中由纳豆菌(Baciuus natto)或纳豆枯草杆菌(B.subtilis natto)产生的丝氨酸蛋白酶[4-5]，研究表明[6-8]纳豆激酶成本低廉，作用迅速，药效时间长，安全性好，具有很强的纤溶活性，不但能直接作用于纤溶蛋白，而且还能激活体内纤溶酶原，从而增加内源性纤溶酶的量与作用，有望称为新型的溶栓药物。响应面分析法(response surface methodology，RSM)是能通过综合实验设计和数学建模得到准确有效结论的实验设计方法[9-10]，被广泛应用于各类发酵条件的优化[11-15]。

本课题组在前期的研究中筛选到一株纳豆芽孢杆菌，采用Plackett-Burman法和响应面分析法的方法对该菌产纳豆激酶的液体发酵条件进行优化，以期获得较高的纳豆激酶产量，对该酶进一步的产业化应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与培养基

1.1.1 材料与试剂

菌种为山东农业大学资源与环境微生物实验室保藏的纳豆芽孢杆菌。

冻干人纤维蛋白原 上海莱士血制品有限公司；凝血酶 美国Sigma公司；尿激酶 阿拉丁公司。

1.1.2 培养基

斜面培养基(g/L)：胰蛋白胨10、酵母抽提物5、NaCl 10，pH7.0；种子培养基：纯牛乳100mL、葡萄糖2.5g；……