抗玉米赤霉烯酮单抗独特型抗体制备与鉴定

余 涛，李大刚，邓 宁，向军俭，宋其芳，贾彦琼，王 宏,*

(1.暨南大学生命科学技术学院，广东 广州 510632；2.广东省农业科学院畜牧研究所，广东 广州 510640)

玉米赤霉烯酮是由禾谷镰刀菌和黄色镰刀菌等真菌产生的有毒次级代谢产物，广泛存在于大量谷物，如玉米、大麦、燕麦、小麦、水稻和高粱等[1]。尽管ZEN的毒性较低，但是对哺乳动物的影响超过雌性激素，研究表明[2]ZEN及其代谢物可以引起猪、牛、家禽的雌激素过多症，以及生殖系统紊乱等症状。此外ZEN具有细胞毒性，并且在体内外表现出潜在的遗传毒性[3]，同样对人类也会产生诸如此类的毒害。因此欧盟及许多国家制定了谷物及饲料中ZEN最大限量标准[4-5]。

目前用于分析谷类粮食、饲料及食品中ZEN含量的方法主要有薄层色谱(TLC)[6]、高效液相色谱(HPLC)[7]、酶联免疫吸附实验(ELISA)[8-9]等。ELISA法已被AOAC批准为玉米、小麦、饲料中ZEN的快速筛选方法[10]。免疫学测定法特点是特异性强、灵敏度高，并且可以现场筛选大量样品。然而由于ZEN免疫学测定法涉及到使用毒素标准品，包括游离物和偶联物，可能对研制者和使用者带来毒害。近来，许多科研机构都在研制半抗原的替代品，如利用噬菌体库筛选多肽模拟ZEN[11]；应用抗独特型抗体(antiidiotype antibody，Aid)模拟皮质醇等[12-13]。抗独特型抗体是针对抗体独特型产生的抗体[14]，根据独特型的不同，分为几种类型，其中能够结合抗原抗体结合部位的Aid称之为Ab2 β，Jerne 称之为抗原的“内影像”，可以模拟抗原的三维结构。本研究是在已制备抗ZEN单抗(Ab1)的基础上，用IgG-KLH偶联物免疫BALB/c小鼠，制备抗ZEN单抗独特型抗体(多抗)，并研究抗独特型抗体与ZEN之间的“内影像”关系，为抗ZEN单抗独特型抗体替代ZEN标准品用于ELISA检测提供理论依据。……