喉咽鳞癌组织中CK4基因的表达及其临床意义

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(1 青岛大学医学院附属医院耳鼻咽喉头颈外科，山东 青岛 266003； 2 即墨市人民医院耳鼻咽喉头颈外科)

细胞角蛋白(CK)是一类由CK基因编码的水溶性聚合多肽，是构成哺乳类动物上皮细胞骨架。肿瘤细胞具有保留产生CK细胞的能力，也可能会获得一种新的能力产生新型的细胞中间丝，因此CK亚型在研究肿瘤细胞不同阶段和分化状态的演进中成为具有潜力的生物学标记物[1]。CK4主要表达于非角化复层鳞状上皮细胞内。研究显示，CK4是食管鳞状细胞癌的重要生物学标记物[2]。目前对于CK4基因的表达与喉咽鳞癌的关系研究较少，本研究采用免疫组化方法检测60例喉咽鳞癌和癌旁黏膜组织中CK4表达，并探讨其临床意义。现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料来源

2005年1月—2008年1月，选取我院耳鼻咽喉-头颈外科手术切除的喉咽鳞状细胞癌标本60例。其中男58例，女2例；年龄44～74岁。肿瘤的病理分级采用2009年美国癌症联合委员会(AJCC)和国际抗癌联盟 (UICC)头颈部肿瘤分级分期标准[3]。60例中高分化4例，中分化35例，低分化21例。对照组选取喉咽癌切除术中肿瘤边缘外1.0～3.0 cm处的黏膜组织，经病理证实未发生癌变。

1.2 免疫组化染色

采用PV 9000二步法进行免疫组化染色，一抗为CK4兔抗人单克隆抗体，具体操作参照说明书进行。PBS代替一抗作为阴性对照，用已知阳性切片作为阳性对照。

1.3 免疫组化结果的判定

显微镜下以细胞膜和(或)细胞浆中出现清晰棕黄色颗粒作为阳性判断标准。染色数量指数和强度指数相乘，得到染色反应指数(IRS)。IRS 0～1分为阴性(-)，2～3分为弱阳性(+)，4～5分为中等阳性()，≥6分为强阳性()。将染色阳性的病理切片先置于200倍显微镜下观察组织中各抗原的表达，然后用VIDAS图像分析仪分析其图像的积分吸光度(A)值，表示抗原的表达水平，A值越大，说明抗原表达的水平越高，反之亦然。相同的方法观察癌旁组织。由2位病理科医生根据标准阅片。

2 结 果

2.1 癌旁组织与喉咽鳞癌组织中CK4的表达

喉咽鳞癌组织中，CK4的表达水平为：(-)6例、(+)20例、()28例、()6例；癌旁组织中，CK4的表达水平为：()8例、()52例。喉咽鳞癌组织与癌旁组织中CK4的表达差异有显著意义(χ2=73.594，P<0.05)。

2.2 喉咽鳞癌不同分化组织中CK4的表达

高、中、低分化鳞癌组织中CK4的表达水平分别为12.71±1.67、9.57±1.06、7.09±1.12，高、中、低分化鳞癌组织中CK4的表达差异均有显著意义(F=57.082，q=7.50～13.02，P<0.05)。

3 讨 论

喉咽癌是恶性程度较高的头颈部肿瘤之一，近年来，喉咽癌发病率呈明显增高的趋势，中国医学科学院肿瘤医院对收治病例统计结果显示，喉咽恶性肿瘤占头颈部恶性肿瘤的1.4%，占全身恶性肿瘤的0.2%[4]。目前有关喉咽癌分子生物学方面的研究资料较少，尚未发现有关CK4基因在喉咽鳞癌中的表达及其与喉咽鳞癌关系的报道。

CK据相对分子质量和化学等电点可分为Ⅰ、Ⅱ两种亚型[2]。不同亚型的CK是由不同的基因在不同的细胞及其细胞发展的不同时期及阶段表达的结果[5]。不同CK在上皮细胞中的表达因所在器官、上皮细胞的类型及分化状态的不同而不同。在组织病理学诊断中，CK的表达可以作为肿瘤性改变和肿瘤性上皮损伤的生物学标记物。CK4是Ⅱ型CK中的一种，是与肿瘤发生、发展关系密切的多肽，主要表达于非角化复层鳞状上皮细胞(食管型)、喉咽部黏膜的无纤毛鳞状细胞及部分基底细胞、声带等非角化复层鳞状上皮。

目前，关于CK4与食管鳞状细胞癌关系的研究较多，通过对癌前病变和侵袭性肿瘤组织进行免疫组化分析显示，CK4主要表达在食管上部非角化复层鳞状上皮细胞内。CHUNG等[6]研究证实，与正常上皮组织相比，CK4在食管鳞状细胞癌组织中的表达会下降80%～85%。研究显示，CK4在食管鳞癌组织中的表达几乎为阴性，而其他肿瘤组织中84%的CK4表达阳性[6]。VIAENE等[7]研究显示，高分化食管鳞状细胞癌中CK4呈局灶性表达，而在低分化的食管鳞状细胞癌中没有检测到CK4的表达。由此可以说明食管鳞状细胞癌的组织学分化程度的不同可以影响CK4因子的表达。CK4在食管鳞状细胞癌的演进过程对食管鳞状细胞癌的早期诊断具有重要的意义。

本文实验结果显示，CK4在癌旁组织中表达呈强阳性，而在喉咽鳞癌组织中表达下调，差异有显著性。CK4在高分化喉咽鳞癌组织中表达水平较高，随着喉咽鳞癌分化程度的降低，CK4在癌组织中的表达也逐渐下降，且差异有显著性。由此推测在由上皮细胞构成的癌旁组织中，CK4仍然保持其稳定和保守的特点。但当由上皮细胞构成的喉咽黏膜发生癌变后，CK4的表达随之发生变化。随着肿瘤性上皮损伤程度的加重，构成上皮细胞骨架的主要成分CK4的结构被破坏就越重，CK4呈现低表达或不表达。因此，CK4在喉咽鳞癌组织中的低表达对探讨喉咽鳞癌的生物学行为有一定的意义，CK4有望成为判断喉咽鳞癌恶性程度的生物学标记物。

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