突发性聋临床特征与血清热休克蛋白70水平相关性的研究

刘慧茹 曹建国 徐永昌 董晶 钱海峰 金杰 冯志伟

·临床研究·

突发性聋临床特征与血清热休克蛋白70水平相关性的研究

刘慧茹 曹建国 徐永昌 董晶 钱海峰 金杰 冯志伟

目的检测突发性聋患者血清热休克蛋白70（HSP70）含量，并初步探讨它与突发性聋患者临床特征之间的关系。方法本研究包括54例突发性聋患者（患者组）和54例正常人（对照组）。用高敏的酶联免疫吸附测定法检测血清HSP70，并观察血清HSP70与突发性聋患者临床特征的相关性，这些临床变量包括年龄，性别，病耳，发病时程，伴随症状（有无眩晕、耳鸣、脑梗死），发病初听力，治疗后听力，听力曲线类型，听力损失程度，听力恢复程度。结果突发性聋患者血清HSP70明显高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。血清HSP70水平与突发性聋患者听力恢复程度有相关性（P＜0.05）。结论血清HSP70可作为突发性聋患者发病初期的血浆标记物，推测HSP70可作为突发性聋患者的一个预后指标。（中国眼耳鼻喉科杂志，2013，13：376-378，382）

突发性聋；热休克蛋白70；临床特征

突发性聋作为耳鼻咽喉科常见疾病，其发病因素尚不明确。长期以来认为耳蜗微循环障碍是其主要发病因素。热休克蛋白（heat shock proteins，HSP）是当机体遭遇应激因素刺激后所产生的保护性蛋白质，在HSP家族中最重要的是HSP70。动物实验发现，当注射顺铂后导致豚鼠耳蜗外耳毛细胞合成HSP72增加，提示HSP70家族对耳蜗损伤有保护作用［1］。对突发性聋患者的外周血中是否可检测到HSP70鲜有文献报道。HSP70是否可作为突发性聋患者发病初的血浆标记物尚不明确。作为一种保护性蛋白质，HSP70与突发性聋临床特征的相关性鲜有报道。关于突发性聋的预后，有文献［2-3］认为和耳聋程度、年龄、是否并发眩晕及听力曲线类型、发病病程等因素有关。但目前很少有文献提出与突发性聋的预后与来自病变耳蜗的血浆标记物是否相关。本研究旨在检测突发性聋患者HSP70水平是否较正常人增高，探讨HSP70是否可作为突发性聋发病的血浆标记物，并探讨HSP70与突发性聋的临床特征及预后的相关性。

1 资料与方法

1.1 资料 收集2008～2011年本院耳鼻咽喉头颈外科入院的突发性聋患者共54例，均符合中华耳鼻咽喉头颈外科杂志编辑委员会、中华医学会耳鼻咽喉头颈外科学分会制定的诊断标准［4］。54例患者中平均年龄为58.4岁（16～84岁），男性29例、女性25例。患耳：左耳27例，右耳26例，双耳1例。21例伴眩晕，34例伴耳鸣，自发病到初治平均时间为4.9 d（0.5～28 d）。取本院实习医师及本院体检中心2008～2011年健康体检者54人作为正常对照组，排除突发性聋、其他耳聋和全身系统性疾病及自身免疫性疾病。对照组平均年龄为34.8岁（14～81岁），男女比例为27∶27。

1.2 治疗方法 治疗方案：改善内耳微循环治疗（银杏叶提取物舒血宁20 mL加入生理盐水250 mL，1次/d静脉滴注）；激素口服冲击疗法（泼尼松片1 mg/kg清晨顿服，每2 d减量10 mg至减为0 mg。激素治疗期间同时给予奥美拉唑20 mg清晨顿服保护胃黏膜）；营养神经治疗（甲钴胺胶囊0.5 mg 3次/d口服）；高压氧治疗1次/d。疗程为20～50 d。每10 d为1个疗程，1个疗程结束后复查听功能，如无改善建议出院，如有改善建议继续治疗，直至听力评估无明显改善方结束治疗。

1.3 听力检测 所有患者均给予纯音测听、声导抗及听性脑干反应测听检测（包括阈值及波形测定）。所有入选患者声导抗检查中鼓室图均为A型，可排除中耳病变。听性脑干反应测听阈值测定排除了伪聋及功能性聋。①纯音测听中检测250、500、1000、2000、4000、8000 Hz气导听力；②将听力曲线分为低频下降型、高频下降型、平坦型及全聋型；③将听力损伤程度分为轻度耳聋（30～50 dB）、中度耳聋（50～70 dB）、重度耳聋（≥70 dB）。

1.4 疗效评定标准 根据中华医学会耳鼻咽喉头颈外科学会制定的突发性聋疗效分级标准进行判定［4］。

1.5 酶联免疫吸附试验（ELASA）检测 每例患者治疗前均取空腹血2 mL用以HSP70检测。取对照组空腹血2 mL用以HSP70检测。所有血样经离心机离心（相对离心力为799×g）1 h后，取血清放置-70℃冰柜待测。取患者组与对照组血清，用ELISA检测HSP70，采用HSP70 ELISA试剂盒（Stressgens StressXpress，Stressgen Biotechnologies，Canada），具体操作严格按试剂盒要求执行。

1.6 统计学处理 用SPSS（11.8版本）进行数据分析。患者组与对照组之间年龄差别较大，为观察年龄差别是否导致资料偏倚，将2组数据进行斜方差分析，结果年龄与HSP70无相关关系，故可排除2组年龄差别对资料统计分析的影响。患者组及对照组的血清HSP70，2组数据呈非正态分布，故对2组数据用t检验分析。HSP70与临床因素之间相关性进行单因素分析（包括t检验、方差分析和单因素相关分析），并用多元线性回归分析进行多因素分析。用方差分析不同听力恢复组的3组患者间的HSP70差异。对突发性聋的疗效进行Logistic逐步回归分析。

2 结果

2.1 临床资料 突发性聋患者耳聋程度：轻度耳聋5例（9.3％）、中度耳聋16例（29.6％）、重度耳聋33例（61.1％）；听力图低频下降型6例（11.1％）、平坦型20例（37％）、全聋型25例（46.3％）、高频下降型3例（5.6％）；听力恢复情况：痊愈12例（22.2％）、显效5例（9.3％）、有效9例（16.7％）、无效28例（51.9％）。

2.2 2组HSP70水平的比较 患者组HSP70水平为（0.658±0.356）ng/mL，对照组为（0.432± 0.233）ng/mL，2组差异具有统计学意义（t=4.122，P＜0.001）。

2.3 HSP70与临床特征的相关性分析 单因素分析：HSP70与年龄，性别，病耳，治疗前听力，治疗后听力，发病时程，是否并发眩晕、耳鸣及脑梗死，听力曲线类型无相关性。HSP70与听力恢复程度有相关性（F= 9.313，P=0.000）。HSP70与耳聋程度有相关性（F= 9.085，P=0.000）。根据多元线性回归分析，HSP70与年龄，发病时程，耳聋程度，听力曲线类型，是否并发耳鸣、眩晕及脑梗死均无相关性。但HSP70与听力预后（即听力恢复程度）有相关性，t=3.159，P=0.003，见表1。将听力预后分为痊愈组、好转组（显效组+有效组）及无效组。这3组的HSP70水平分别为（0.51± 0.36）、（0.71±0.25）、（0.89±0.21）ng/mL。方差分析（LSD）结果：好转组与无效组间差异有统计学意义（P＜0.01），痊愈组与无效组间差异有统计学意义（P＜0.01），痊愈组与好转组间差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.4 突发性聋疗效的Logistic回归分析 对突发性聋的疗效进行Logistic逐步回归分析，Y变量为听力恢复程度：1为有效、0为无效。X变量为治疗前听力、听力类型、耳聋程度、纤维蛋白原、HSP70、是否伴发眩晕。听力类型将其做成亚变量置入方程。结果显示突发性聋的疗效与血清HSP70水平有关，与听力类型及治疗前听力、耳聋程度、纤维蛋白原水平、是否伴发眩晕均无关。

表1 HSP70与临床变量的相关性（多元线性回归分析）

3 讨论

生物细胞在许多应激因素如缺血、缺氧、热刺激、毒物及重金属中毒等作用后，发生热休克反应，启动一类高度保守的HSP合成。HSP作为分子伴侣，在应激状态下促进损伤变性蛋白质的复性或降解，因此具有很重要的细胞保护作用。根据相对分子质量的不同，HSP可以分为许多家族，其中最主要的是66×103～78×103大小的HSP70家族［5］。文献［6］报道剧烈运动后外周血可检测到明显升高的HSP70，提示组织或器官内的HSP70在应激状态下可释放入外周循环。王晓明等［5］提出细胞内HSP70可能通过脂筏或Exosome介导的分泌途径释放到细胞外，作为一种生物活性因子影响多种疾病的进程。在心血管疾病的早期、动脉粥样硬化疾病、外周血管疾病及肾血管疾病患者的外周循环血中细胞外HSP70水平高于正常人，且其水平与疾病的病理过程密切相关［7-8］。

目前关于外周血HSP70与突发性聋相关性研究鲜有报道。Park等［9］研究发现突发性聋患者外周血HSP70明显高于正常对照组，且HSP70与突发性聋的预后明显相关。本研究通过用高敏的ELISA检测血清HSP70水平，结果发现与对照组相比，突发性聋组患者血清HSP70水平明显升高，差异具有统计学意义，该结果与Park结果一致。突发性聋目前的病因及发病机制尚不明确，但多数学者认为耳蜗微循环障碍是导致突发性聋的主要原因。我们推测在突发性聋发病中，微循环障碍可导致耳蜗的供血障碍和缺氧改变，在缺血、缺氧的应激因素下，耳蜗局部的HSP70表达，对耳蜗损害起保护作用。而耳蜗细胞内的HSP70释放到细胞外液，随血液循环到达外周血，可被ELISA检测到。突发性聋患者外周血HSP70较对照组明显增高，提示发病初，HSP70可作为发生突发性聋病变时耳蜗损害的潜在血清标记物。

通过分析HSP70与突发性聋临床特征的关系，发现HSP70与年龄，性别，病耳，发病时程，耳鸣、眩晕、脑梗死等伴发症状，治疗前听力，听力曲线类型均无相关性。HSP70与耳聋程度在单因素分析时有相关性，但在多因素回归分析时却无相关性。这也许是因为标本样本量不够大或样本分布不平衡导致的统计偏差所致。将来需要更大样本量的临床试验来进一步验证两者的临床相关性。

本研究发现血清HSP70水平和患者听力恢复程度明显相关，结果提示血清HSP70值可作为临床上判断突发性聋患者的预后的一个指标。本研究发现痊愈组，好转组和无效组间的HSP70均值明显不同，HSP70值越高，听力预后越差。该结果似乎与HSP70作为一保护性蛋白的作用相悖：HSP70过度表达的细胞能使细胞从应激刺激中尽快恢复，且能尽快恢复因缺血、缺氧继发的神经损伤［10］。我们推测这可能是因为检测的为外周血HSP70（即细胞外HSP70），而非耳蜗细胞内HSP70。而王晓明等［5］提出细胞外HSP70可能以不同的生物学机制参与一些疾病的病理过程。

综上所述，发病初血清HSP70可作为评估突发性聋病变时耳蜗损害的潜在血清标记物。发病初血清HSP70检测可作为评估突发性聋患者预后的参考指标。未来可通过动物实验来进一步分析外周血HSP70和耳蜗局部HSP70间的关系，并揭示它的可能临床价值。

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Correlation between the clinical characteristics in patientswith sudden sensorineural hearing loss and serum heat shock protein 70

LIUHui-ru，CAO Jian-guo，XU Yong-chang，DONG Jing，QIANHai-feng，JIN Jie，FENGZhi-wei.Department of Otolaryngology Head and Neck Surgery，Yangpu Central Hospital，Shanghai 200090，China Corresponding author：XU Yong-chang，Email：yongchangxu99＠hotmail.com

Objective To investigate the level of serum heat shock protein 70（HSP70）in patientswith sudden sensorineural hearing loss（SSNHL），and to observe the possible correlation between HSP70 and the clinical characters of SSNHL.Methods Fifty four patients with SSNHL and 54 normal controls were included in this study.Their serum HSP70 levels were detected with highly sensitive enzyme-linked immunoadsorbent assay test（ELISA）.Clinical variables including age，sex，ear，time course，accompanying symptoms（such as vertigo，tinnitus，cerebral infarction），initial audiometric results，final audiometric results，auditory rehabilitation degree，auditory severity degree and threshold curve typewere analyzed to find the possible correlation between HSP70 and the clinical characters of SSNHL.Results Serum HSP70 levels were significantly higher in patientswith SSNHL than the normal controls by ELISA test（P＜0.05）.There was significant correlation between serum HSP70 levels and the auditory rehabilitation degree in patients with SSNHL（P＜0.05）.Conclusions This report shows elevated serum HSP70 levels in patients with SSNHL compared with normal controls.We suggest that the serum HSP70mightbe used as the initial plasmamarker of sudden deafness patients and that the serum HSP70 levelsmight have a clinical predicting role in patients with SSNHL.（Chin JOphthalmol and Otorhinolaryngol，2013，13：376-378，382）

Sudden sensorineural hearing loss；Heat shock protein 70；Clinical characteristic

2012-12-14）

（本文编辑 杨美琴）

上海市杨浦区中心医院耳鼻咽喉头颈外科 上海 200090

徐永昌（Email：yongchangxu99＠hotmail.com）