广西不同地区穿心莲药材质量评价

唐维宏 滕美春 廖红兰 张 如 马健雄

1.广西壮族自治区北海市中医医院，广西 北海 536000;2.广西壮族自治区妇幼保健医院，广西 南宁 530003; 3.广西金海堂药业有限责任公司，广西 南宁 530313

穿心莲为爵床科穿心莲属植物Andrographis paniculata (Burm.f.)Nees，以全草或叶入药，具有清热解毒、凉血消肿等功效［1］。穿心莲的主要有效成分为二萜内酯类成分，主要包括穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯等［2］。清火栀麦片是我公司常年生产的国家基本药物品种之一，对其组方成分之一的穿心莲需求量甚大。为满足生产需求，我们开展了1000多亩穿心莲药材GAP规范化种植基地试验。为检验药材质量，我们参考相关文献和药典标准［3～4］，对产自广西南宁、玉林、梧州GAP基地及普通产地的穿心莲药材进行对比研究。

1 实验材料

1.1 仪器 高效液相色谱仪 (SHIMADZU，SPD－10A VP Plus)、电子天平 (SHIMADZU，AUW120D型)、超声波清洗仪 (昆山市超声仪器有限公司，KQ2200型)。

1.2 试剂 甲醇为色谱纯;水为重蒸馏水，自制;穿心莲内酯对照品 (批号:110797－200307，中国药品生物制品检定所);脱水穿心莲内酯对照品 (批号:110854－200306，中国药品生物制品检定所)

1.3 药材 穿心莲，于2011年9月分别采自广西南宁、玉林、梧州GAP基地及广西其他普通产地。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及溶液的制备

2.1.1 色谱条件 色谱柱:Diamonsil－ODS C18(250mm× 4.6mm，5μ);流动相为甲醇－水 (65:35);流速为0.8ml/min;检测波长为225nm(0～15min)用于检测穿心莲内酯;254nm(15～25min)用于检测脱水穿心莲内酯;柱温:25℃。

2.1.2 对照品溶液的制备［4］精密称取穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯对照品适量，置于50ml容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每毫升含穿心莲内酯0.1146mg，脱水穿心莲内酯0.1037mg的对照品混合溶液。

2.1.3 供试品溶液的制备［4］取60℃ 下干燥至恒重的穿心莲药材粉末 (过四号筛)0.5g，精密秤定，置具塞锥形瓶中，精密加入40%甲醇25ml，称定重量，浸泡1h，超声处理 (功率250W，频率33KHz)30分钟，放冷，再称定重量，用40%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液10ml，置中性氧化铝柱 (200～300目，5g，内径1.5cm)上，用甲醇15ml洗脱，收集洗脱液，置50ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45μm有机相微孔滤膜滤过，作为供试品溶液。

2.2 系统适用性考察 分别取“2.1.2”项下对照品溶液，供试品溶液及阴性对照溶液注入液相色谱仪，记录色谱图(图1)。由图可见，阴性对照溶液图谱在穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰位置处无干扰，穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯峰与其他组分峰完全分离;理论塔板数N(穿心莲内酯)= 2136，N(脱水穿心莲内酯)=3024，符合中国药典要求［4］。

2.3 线性关系考察 精密称取“2.1.2”项下对照品溶液1.0ml、3.0ml、5.0ml、7.0ml、9.0ml，分别置于25ml容量瓶中，加甲醇定容稀释至刻度，分别进样 (各进3针)，以平均峰面积积分值为纵坐标 (y)，以浓度 (mg/ml)为横坐标 (x)，绘制标准曲线。穿心莲内酯标准曲线:y= 45087796.68x+37058.3，r=0.9999;脱水穿心莲内酯标准曲线:y=44899658.63x－25400.4，r=0.9999。线性范围:穿心莲内酯为0.11～1.03mg/ml;脱水穿心莲内酯为0.10～0.93mg/ml。

2.4 精密度试验 精密吸取上述“2.1.2”项下对照品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件重复测定5次，每次进样量为20μl，记录峰面积，RSD(穿心莲内酯)= 0.18%，RSD(脱水穿心莲内酯)=0.35%，表明仪器精密度良好。

2.5 重复性试验 取同批号 (GAP基地－广西玉林)样品6份，按“2.1.3”项方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件重复测定6次，每次进样量为20μl，外标两点法计算含量，RSD(穿心莲内酯)=0.25%，RSD(脱水穿心莲内酯)=0.28%，说明该方法重复良好。

2.6 稳定性试验 取同一样品溶液 (GAP基地－广西玉林)，分别于0、2、4、6、8、10h各进样20μl，记录峰面积，RSD(穿心莲内酯)=0.96%，RSD(脱水穿心莲内酯)=0.85%，表明该样品溶液在10h内稳定。

2.7 加样回收率试验 精密称取已知含量的穿心莲药材粉末 (GAP基地－广西玉林)约0.25g，共6份，分别置具塞锥形瓶中，分别精密加入穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯对照品溶液适量，混匀后按“2.1.3”项方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件测定，分别进样20μg，计算回收率，结果见表1、表2，RSD(穿心莲内酯)= 1.32%，RSD(脱水穿心莲内酯)=1.12%，表明该方法回收率较好。

表1 穿心莲内酯加样回收率试验结果

表2 脱水穿心莲内酯加样回收率试验结果

2.8 GAP基地与普通产地穿心莲样品含量测定 取来源于广西南宁、玉林、梧州GAP基地及广西其他普通产地共10批穿心莲药材，按“2.1.3”项方法制备供试品溶液，按“2.1.1”项下色谱条件测定含量，结果见表3，从表中可以看出产自GAP基地的穿心莲药材所含穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯总量普遍高于普通产地。

表3 不同产地穿心莲药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量

3 讨论

3.1 检测波长的确定 分别比较了225nm、254nm及 225nm(0～15min)和254nm(15～25min)条件下穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的峰面积，结果发现分段检测其值最大，故选择检测波长为225nm(0～15min)，用于检测穿心莲内酯，254nm(15～25min)用于检测脱水穿心莲内酯，所确定的检测波长与国家药典［4］收载的数据一致。

3.2 流动相的选择 曾采用乙腈－水 (65:35)、甲醇－水 (60:40)等多种溶剂体系作为流动相，色谱分离效果和峰形均不理想。综合考虑峰形、分离度、出峰时间等因素，经反复摸索，发现甲醇－水 (65:35)作为流动相最为理想。

3.3 通过我们的研究证明，产自GAP规范化种植基地的穿心莲药材有效成分普遍高于普通产地，且相对较稳定，该法是提高药材质量的有效途径，值得推广。

［1］江苏新医学院.中药大辞典 (下册).［M］.上海:上海科学技术出版社，1986.

［2］王国才，胡永美，张晓琪，等.穿心莲的化学成分［J］.中国药科大学学报，2005，36(5):405～407.

［3］谢青，陈珠灵，洪培山，等.反相高效液相色谱法同时测定穿心莲药材中穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯的含量［J］.时珍国医国药，2009，20(5): 1194～1195.

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典(2010版一部).［S］.北京:中国医药科技出版社，2010.