RP-HPLC测定药流净颗粒中三七皂苷R1与人参皂苷Rg1、Rb1的含量

杨学芳 苏万福 唐晓霞 吴 菲

江苏济川制药有限公司，江苏 泰兴 225441

RP-HPLC测定药流净颗粒中三七皂苷R1与人参皂苷Rg1、Rb1的含量

杨学芳 苏万福 唐晓霞 吴 菲

江苏济川制药有限公司，江苏 泰兴 225441

目的：建立药流净颗粒中三七皂苷R1与人参皂苷Rg、Rb1的含量测定方法。方法：采用反相高效液相色谱法，色谱柱为Phenomenex Luna C18（2）（5μm，250mm×4.60mm），流动相为乙腈（A）和水（B），梯度洗脱；A相含量随时间的变化为17%（0～8min），17%～22%（8～15min），22%（15～28min），22%～26%（28～38min），26%～31%（38～40min），31%～38%（40～50min），38%（50～60min）；流速为1ml/min，检测波长为203nm，柱温为20℃。结果：三七皂苷R1浓度为76～1211μg/ml、人参皂苷Rg1浓度为83～1334μg/ml、人参皂苷Rb1浓度为95～1514μg/ml时，线性关系良好（rR1＝0.9998、rRg1＝0.9999、rRb1＝0.9999）；加样回收率（n＝3）分别为98.36%、99.83%、98.81%。结论：本方法准确、快速、稳定、重现性好，可用于药流净颗粒的质量控制。

三七；三七皂苷R1；人参皂苷Rg1；含量

三七为五加科植物，含有大量的三七皂苷、三七多糖、黄酮等有效成分。具有散瘀止血，消肿定痛的作用。用于咯血，衄血，外伤出血，胸腹刺痛，跌扑肿痛［1］。其制剂药流净颗粒以三七为主要含量测定指标，包括三七在内的十余种中药。目前有关文献报道测定三七皂苷的方法有薄层扫描法、高效液相色谱法 （HPLC）等［2－3］。笔者采用RP－HPLC法测定三七中活性成分三七皂苷R1、人参皂苷Rg1及Rb1的含量，方法快速，结果准确，可用于三七药材及其制剂的质量控制。

1 仪器和试药

1.1 仪器 美国Agilent高效液相色谱系统（G1312A二元泵、G1314A检测器METTLER AB135－S电子分析天平；BOLONG USC－502超声仪。

1.2 试药 三七皂苷R1对照品（110745－200415）、人参皂苷Rg1对照品（110703－200726）、人参皂苷Rb1对照品（110704－200420）均购于中国药品生物制品检定所。药流净颗粒为我公司自制产品；乙腈为色谱纯 （MERCK）；水为双蒸水；其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件及系统适用性试验 色谱柱：Phenomenex Luna C18（2）（5μm，250×4.60mm）柱；流动相：乙腈（A）和水 （B），梯度洗脱；A相含量随时间的变化为17%（0～8min），17%～22%（8～15min），22%（15～28min），22%～26%（28～38min），26%～31%（38～40min），31%～38%（40～50min），38%（50～60min）；检测波长：203nm；流速：1m l/min；进样量：20μl；柱温：20℃。结果3个指标理论塔板数均不低于6000。见图1、图2、图3。

2.2 溶液制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1，分别为15.14、16.68、18.92mg，置10ml容量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，即得浓度分别为1.514、1.668、1.892mg/ml的母液，精密量取上述混合对照品溶液1.6、1.2、0.8、0.5、0.25、0.10ml，分别置2ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得系列浓度的对照品溶液，置于4℃冰箱保存。

2.2.2 药流净颗粒样品溶液的制备［4］取本品内容物，研细，取约3g，精密称定，加热水50ml使溶解，用水饱和正丁醇萃取6次，每次50ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次80ml，取正丁醇层，蒸干，残渣用甲醇溶解，并转移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，滤过，取续滤液即得。

2.3 线性关系考察 分别将“2.2.1”项下制备的不同浓度的系列对照品溶液按 “2.1”项下色谱条件依次连续进样，分别重复2次，以对照品溶液浓度 （X，μg/ml）对峰面积 （Y）进行线性回归，呈良好的线性关系 （见表1）。

表1 3种皂苷的线性关系

2.4 精密度试验 精密吸取“2.2.1”项下制备的人参皂苷系列混合对照品溶液中的第1、4、6三个点作为低、中、高三个浓度点，分别连续进样6次，根据所得峰面积考察其精密度，结果3种皂苷的日内精密度低浓度点RSD%均＜2%，中、高浓度点RSD%均＜1.5%

2.5 稳定性试验 取制备的药流净颗粒制剂样品溶液，分别在0、2、4、6、8、24h测定3种皂苷的峰面积，考察其稳定性。药流净颗粒制剂样品溶液中3种皂苷R1、Rg1、Rb1峰面积RSD%分别为1.39%、1.56%、1.41%；表明供试品溶液在24h内稳定。

2.6 重复性试验 精密称取同一批次药流净颗粒制剂样品5份，各约3g，按“2.2.2”项下方法分别制成样品溶液，进行分析。三七中3种皂苷R1、Rg1、Rb1的平均含量和RSD%（n＝5）分别为0.580mg/g（RSD%＝1.56%），2.379mg/g（RSD%＝1.40%），2.241mg/g（RSD%＝1.63%）。

2.7 加样回收试验 精密称取已知含量的同一批药流净颗粒制剂样品3g共9份，每3份为一组，按低、中、高3个水平分别加入对照品一定量 （样品各成分含量的80%、100%、120%），按“2.2.3”项下制备，进样分析，结果3种皂苷R1、Rg1、Rb1的回收率和RSD%（n＝3）分别为98.36%（RSD＝1.10%），99.83%（RSD＝1.58%），98.81%（RSD＝1.13%）。结果表明，本方法回收率结果良好。

2.8 样品测定 取3个批次的药流净颗粒（批号分别为100122，100124，100127）按“2.2.2”项下制备3批样品的供试品溶液，依 “2.1”项下色谱条件分析计算样品含量，结果见表2。

表2 各批次药流净颗粒中3种皂苷含量测定结果

3 讨论

3.1 色谱柱的选择 在色谱柱的选择上主要考察了250mm ×4.6mm与150mm×4.6mm两种规格，结果发现，长柱较短柱而言，分离度有明显提高，而分析时间只是略有延长，仍然在预期时间内将3种皂苷分离完全，故选用250mm× 4.6mm色谱柱。

3.2 柱温箱温度的选择 试验的过程中，我们发现温度对3种皂苷分离的影响较大，适当的降低温度，有利于提高各目标峰的分离度，但不可过低的降低温度，否则会增加流动相的黏度，从而影响分离效果，试验考察了4个温度30、20、10℃，结果表明，20℃时分离效果最好，因此将其选为最佳温度。

［1］国家药典委员会.中国药典（一部）［S］中国医药科技出版社，2010：11－12.

［2］何元凯.双波长薄层扫描测定血塞通片中人参皂苷Rg1、Rb1、三七皂苷R1的含量［J］.中国民族民间医药杂志，2003，64：292－294.

［3］苏静，朱卫泉.RP-HPLC梯度洗脱法测定血塞通片中三七皂苷R1、人参皂苷Rb1及人参皂苷Rg1的含量［J］.药物分析杂志，2005，25（2）：212－214.

［4］梁懿，蒙连琼.田七痛经胶囊检测方法的研究 ［J］.药物分析杂志，2008，28（2）：278－281.

R282.71

A

1007－8517（2013）09－0017－02

2013.03.13）

杨学芳，女，执业中药师，助理工程师，中药分析。E－mail：yangxuefang－1234＠163.com。