cPKCγ在HPC抗N2a细胞OGD损伤中作用及其分子机制

罗 宏，苏吉儿，韩 松，李俊发

(首都医科大学神经生物学系北京脑重大疾病研究院，北京100069)

国内外研究数据显示，血管相关性疾病位于国民死亡原因之首，其中脑卒中作为一种高致死、高致残性疾病，给各国家庭和社会带来了巨大的经济损失和精神负担［1－2］。然而，目前临床对脑卒中的治疗尚缺乏有效的治疗措施［3－4］。缺血/低氧预适应(I/HPC)可提高组织器官对继发严重缺血/低氧损伤的耐受，对这一内源保护机制的研究，可为脑卒中临床治疗打开新视野［5］。近年研究表明，HPC 形成的众多可能机制均涉及蛋白激酶C (PKC)的参与，且本实验室前期研究发现，经典型PKC Ⅱ(cPKCⅡ)、γ (cPKCγ)和新奇型PKCε(nPKCε)的膜转位(激活)水平增高参与了小鼠脑HPC 形成的同时，cPKCγ 及其相互作用蛋白在HPC 保护缺血脑组织中发挥着重要作用［6－8］。据此，本实验拟利用小鼠成神经瘤细胞(N2a)的单纯低氧和氧糖剥夺(OGD)模型，来模拟脑HPC 和缺血损伤，从离体水平上进一步证实cPKCγ 在HPC 对抗N2a 细胞OGD 损伤中作用并探讨其可能的细胞分子机制。

1 材料与方法

1.1 材料

兔源性LC3(Ⅰ、Ⅱ)抗体、鼠源性β-actin 抗体、蛋白酶抑制剂(亮肽酶素、抑肽酶、胃酶抑素A 及糜蛋白酶抑制素)、磷酸酶抑制剂(KF、冈田酸、焦磷酸钠、原矾酸钠)、脂氧胆酸钠、DTT、NP-40、EDTA、EGTA、MTT、DMSO 和cPKCγ 抑制剂Go6983(Sigma-Aldrich 公司);辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔/鼠二抗(中山金桥生物技术有限公司);ECL 发光试剂盒(威格拉斯生物技术有限公司);BCA 蛋白定量试剂盒(Pierce 公司);凋亡试剂盒、CytoTox 96® 非放射性细胞毒性检测试剂盒(Promega 公司);Bio-MaxMR X-线胶片(Kodak 公司)。

1.2 N2a 细胞HPC 和OGD 模型制备

小鼠N2a 成神经瘤……