与人遗传病相关的DNA重复序列的体外核小体定位特性

柴 荣，赵宏宇，蔡 禄

(内蒙古科技大学数理与生物工程学院，内蒙古包头014010)

人们已经发现40 余种人类神经系统遗传疾病与DNA 重复序列扩增或删除有关［1］，比如，(CTG)n·(CAG)n 的扩增或删除可能会引起脊髓小脑共济失调1、2、3、6、7、8、12 和17 型以及肌强直性营养不良1 型等，位于FRDA 基因1 号内含子上的GAA重复序列异常扩增会引起Friedreich 共济失调［2］，ATXN10 基因含有较长的ATTCT 重复片段会导致脊髓小脑共济失调10 型［3］，而肌强直性营养不良2 型则可能与(GCCT)n·(CAGG)n 扩增有关［4］。近十余年该领域的研究主要集中在重复序列形成的异常2 级结构以及遗传不稳定性［5］，对于重复序列的核小体定位以及对染色质结构影响了解甚少。仅有少量工作表明，将重复序列纯化后，体外与组蛋白组装形成核小体的能力有所差异，发现CTG 重复片段容易形成核小体［6］，ATTCT 重复序列对组蛋白的亲和性较强［7］，而GAA 重复序列则很难形成核小体［8］。Widom 601 序列是较为稳定、容易形成核小体的序列［9］。本实验构建了含有601 序列的重组质粒pUC601 作为对照，并体外用盐透析法组装染色质及摸索微球菌核酸酶酶切条件。然后用本实验室构建的含有上述人遗传病相关重复序列的质粒体外组装染色质与微球菌核酸酶酶切分析方法，在质粒层次初步研究了重复序列核小体定位的特性，为该类疾病机理的理解奠定了一定的基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验菌株:大肠杆菌DH5α、质粒pUC19、pBS-601 由本实验室保存。重组质粒pUC(GAA)42、pUC(ATTCT)43和pUC(GCCT)18由本实验室构建，在质粒的多克隆位点分别含有重复序列(GAA)42、(ATTCT)43和(GCCT)18［10］。

1.1.2 试剂:质粒小提试剂盒(上海生工)，微球菌核酸酶(MNase)、LD1000 标志、宽谱DNA 标志、蛋白酶K、限制性内切酶和T4 DNA 连接酶(TaKaRa公司)。……