动物源性食品中喹诺酮类药物残留量检测的研究进展

崔常勇 （龙口出入境检验检疫局 山东 龙口 265700） 徐 宁 （山东省龙口市发展和改革局）

动物源性食品中喹诺酮类药物残留量检测的研究进展

崔常勇 （龙口出入境检验检疫局 山东 龙口 265700） 徐 宁 （山东省龙口市发展和改革局）

喹诺酮类药物是一类人工合成的能作用于细菌的DNA而造成不可逆损害的抗生素，因其具有抗菌谱广、抗菌活性强、与其他抗菌药物无交叉耐药性和毒副作用小等特点，被广泛应用于人和动物的治疗，因此也对食品安全和社会公共卫生造成严重威胁。本文结合国内外研究喹诺酮类药物残留检测的相关文献，概括总结了该类药物的理化检测法、微生物检测法和免疫分析法等主要检测方法，旨在为今后喹诺酮类残留物检测方法的研究提供一个重要依据。

1 理化检测法

1.1 高效液相色谱法 高效液相色谱法具有分离度较好、灵敏度高、重现性好、假阳性少等优点，但前处理过程复杂、仪器成本高、回收率偏低，不能对样品进行完全定性检测。

董艳峰等[1]建立了HPLC法测定鸡肝中5种氟喹诺酮类药物残留，方法采用荧光检测器检测，5种药物的线性相关系数均大于0.999，平均回收率为70.2%～98.2%，相对标准偏差为4.6%～12.1%，检出限和定量限分别为0.02μg/g和0.05μg/g，适用于鸡肝中5种氟喹诺酮类药物残留的检测。赵思俊等[2]采用高效液相色谱法法检测鸡肉和猪肉中7种喹诺酮类药物残留，线性范围为0.3～100μg/L，线性相关系数高于0.9989，平均回收率为70.4%～105.8%，检测限为10-8～3×10-8%，能够满足检测要求。杨守国等[3]建立了一种高效液相色谱-荧光测定方法，检测养殖海水中诺氟沙星、环丙沙星和恩诺沙星3种喹诺酮类药物。结果表明：以上3种药物的检出限分别为2、1和1μg/L，定量限分别为6.6、3.3和3.3μg/L，回收率为71.9%～85.3%，批内变异系数≤10%，批间变异系数≤7%。

1.2 联用技术 联用技术是利用色谱技术与质谱技术结合使用来进行检测的一种技术。该技术结果较为准确，能对样品进行定量和定性检测，能满足进出口产品各项技术指标的检测，可用于动物性产品中喹诺酮类药物残留的确证检测，但有着前处理过程复杂、仪器成本高和耗时比较长等缺点。应用较多的有液相色谱一质谱联用法(LC-MS)，高效液相色谱一串联质谱法(HPLCMS/MS)，液相色谱一荧光法(LC-FD)等。

黄优生等[4]建立了快速测定鱼肉中4种氟喹诺酮类药物残留的HPLC-MS/MS方法，该法对4种药物的线性范围为2～40μg/kg，相关系数大于0.997，回收率为79.9%～98.1%，相对标准偏差为2.7%～8.7%，检出限为0.1～0.4μg/kg，定量限为0.3～1.0μg/kg。Hassouan M K等[5]研究了同时检测猪肾中8种喹诺酮类药物残留的LC-FD法，检测限为10-7%～8×10-7%。何强等[6]采用超高效液相-串联质谱法同时测定蜂蜜中15种喹诺酮类药物残留，用Oasis HLB固相萃取柱净化，检出限低于或等于1.0ng/ml，回收率均为78.6%～112.9%范围内，相对标准偏差不超过10%。

1.3 高效毛细管电泳法 高效毛细管电泳法(HPCE)是以高压电场为驱动力，以毛细管为分离通道，依据待检测样品中各组分在毛细管电场中的迁移速度的不同而进行分离的一种液相分离技术。此法分离率高，速度快、操作简单、色谱柱不受样品污染、样品用量少，但对检测器的要求标准很高，价格昂贵。作为一种较为有效的分离技术，高效毛细管电泳法有着广阔的应用前景。

田晶晶等[7]采用高效毛细管电泳法分离检测加替沙星、洛美沙星、依诺沙星、环丙沙星和氧氟沙星等5种喹诺酮类药物。在检测波长为268nm时，确定最佳试验参数，此时5种药物在9min内基线分离，样品浓度在2×10-6～4×10-6mmol/L之间。此法检测市售洛美沙星片中洛美沙星的质量分数为36%，回收率为109.4%。李日锋等[8]利用区带毛细管电泳法建立了同时分离检测6种喹诺酮类抗生素。结果表明：6种药物在10min内完全基线分离，线性关系大于0.9929，检出限为29～51μg/L，相对标准偏差小于4%。此外，Matthias F等[9]建立了分离9种喹诺酮类药物的毛细管电泳方法，检测限低于1μg/L。

2 微生物检测法

微生物检测法是一种传统的生物活性测定方法，是最早被应用的检测方法。根据药物对微生物的生理机能和代谢的抑制来检测药物残留，此法的优点在于简单经济，适合大规模的定性筛选，但是结果易受干扰，耗时较长。

陈迁等[10]建立了自动化微生物比浊法测定血清中环丙沙星的残留，检出低限为0.03μg/ml。黄晓蓉等[11]利用微生物检测法测定鳗鱼及其制品中喹诺酮类药物残留，回收率为75.89%～83.12%，检测限为环丙沙星2×10-6%，恩诺沙星2.5%，其他喹诺酮类药物5×10-6%～2.5×10-6%。此外，杜黎明等[12]用管碟法I号培养基制备双蝶，以大肠杆菌为实验菌测定了血清中氧氟沙星的含量。

3 免疫分析法

免疫分析法是一种以抗原和抗体的特异性、可逆性结合为基础的新型技术，可以定量及半确证检测动物性产品中喹诺酮类药物残留，该法操作简单、速度快、分析成本低，但是假阳性率较高。主要包括酶联免疫分析法(ELISA)、放射免疫分析法(RIA)、荧光免疫分析法(FIA)、酶免疫分析法(EIA)和胶体金免疫测定法(CGIA)等，下面主要介绍酶联免疫分析法(ELISA)。

酶联免疫法是以抗原和抗体特异性反应为基础，结合酶与底物的特异性反应来放大反应灵敏度的分析方法。刘欢欢等[13]采用间接竞争ELISA方法检测鸡蛋中喹诺酮类药物残留，结果显示，在5～50μg/kg浓度添加范围的平均回收率为70%以上，批内变异系数≤10%，批间变异系数≤15%，检测限为5μg/kg，低于国家规定的残留限，能够满足初筛的工作需要。郑晶等[14]运用酶联免疫分析方法检测了鳗鱼中喹诺酮类药物残留，其中此法对诺氟沙星的灵敏度可达到0.3μg/kg，对诺氟沙星的交叉反应率最高，对恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星及单诺沙星的交叉反应率为30%～60%。

另外，其他的免疫分析方法也有相关报道。放射免疫分析法是将放射性同位素示踪技术和免疫化学技术结合起来的方法；胶体金免疫层析法则是操作简单，特异性强，不需要额外设备。刘烜等[15]制成了胶体金免疫层析试剂用于快速检测样品中的喹诺酮类药物残留，采用免疫竞争法，根据颜色显示达到定性目的，灵敏度可达到10ng/ml，只需3～5min，并且与类似物无交叉反应。

4 结语

综上所述，喹诺酮类药物残留的检测技术复杂多样，在实际检测工作中应合理选择方法，尽量选择灵敏度高、特异性好、简便快速的检测方法，在保证结果准确的同时提高工作效率。微生物检测法灵敏度不够，检测限常高于药物的最大残留限量，可用于初筛工作。高效毛细管电泳法在检测的准确性和灵敏度等方面不如高效液相色谱法，因而此法的应用有其局限性。ELISA法操作简单、快速、特异性和灵敏度较好、操作安全，易出现假阳性结果，适合于大批样品的快速初筛检测。高效液相色谱法虽然前处理复杂，仪器成本较高，但凭借高效灵敏，快速准确等优点而得到广泛应用，常与质谱联用来对样品进行定性确证。

近年来，喹诺酮类药物的广泛使用给农业、畜牧业，水产养殖业及其产品的进出口贸易带来巨大危害，国家已经禁止对该药的使用并对最大残留限量做出明确规定。目前，对喹诺酮类药物残留检测技术的研究正处于不断发展和完善的阶段，研究快速、准确、有效的检测技术有着广阔的发展前景，同时也为动物性产品的进出口贸易提供技术保障。

[1] 董艳峰, 于静泉, 张巍. 超高效液相色谱法同时测定鸡肝中五种氟喹诺酮类药物残留[J]. 中国兽药杂志, 2010, 44(6)：5-8.

[2] 赵思俊, 李存, 江海洋等. 高效液相色谱检测动物肌肉组织中7种喹诺酮类药物的残留[J]. 分析化学, 2007, 35：786.

[3] 杨守国, 李兆新, 王清印等. 高效液相色谱法检测海水养殖环境中喹诺酮类药物残留[J]. 渔业科学进展, 2010, 31(2)：95.

[4] 黄优生, 刘波平, 朱筱玲等. 高效液相色谱一串联质谱法快速测定鱼肉中4种氟喹诺酮类药物残留[J]. 食品科学, 2010, 31(2)：127.

[5] Hassouan M K, Ballesteros O,Zafra A, et a1. Multiresi-due method for simultaneous determination of quinolone antibacterials in pig kidney samples by liquid chromatography with fuorescence detection[J]. J Chromatogr B, 2007, 859：282.

[6] 何强, 孔祥虹, 李建华等. 超高效液相一串联质谱法同时测定蜂蜜中15种喹诺酮类药物残留[J]. 分析试验室, 2010, 29(3)：101.

[7] 田晶晶, 邓宁, 何建波. 高效毛细管电泳分离检测5种喹诺酮类抗生素[J]. 合肥工业大学学报, 2009, 32 (8)：1170.

[8] 李日锋, 吴虹, 宗敏华. 区带毛细管电泳法同时分离检测6种喹诺酮类抗生素[J]. 现代食品科技, 2009, 25(12)：1468.

[9] Matthias F, Agnieszka K, Thuy D T V, et a1. Improved capillary electrophoretic separation of nine(fluoro)quinolones with fluorescence detection for biological and environmental samples[J]. J Chromatogr A,2004, 1047：305.

[10] 陈迁. 自动化微生物比浊法测定血清中环丙沙星浓度[J]. 中国临床药理学与治疗学, 1998(3)：190-191.

[11] 黄晓蓉, 郑晶, 李寿崧等. 鳗鱼及其制品中喹诺酮类药物残留的微生物快速检测方法研究[J]. 淡水渔业, 2005, 35(4)：3.

[12] 杜黎明, 吴吴, 陈彩萍. 喹诺酮类药物的分析方法与应用[M]. 北京：科学出版社, 2006：164.

[13] 刘欢欢, 于学辉, 彭莉等. 用ELISA方法检测鸡蛋氟喹诺酮类药物残留的研究[J]. 西南民族大学学报, 2008, 34(6)：1182.

[14] 郑晶, 黄晓蓉, 郑俊超等. 微生物抑制法与酶联免疫法检测鳗鱼中喹诺酮类药物残留的比较研究[J]. 中国卫生检验杂志, 2006,16(1)：79.

[15] 刘烜, 郑文杰, 贺艳等. 胶体金免疫层析法快速检测组织样品中喹诺酮类药物残留[J]. 食品研究与开发, 2009, 30(5)：131.

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