西洋参茎叶总皂苷减轻大鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤机制的研究*

王　琛,　刘　蜜,　王晓礽,　宋丹丹,　刘秀华△,　史大卓△

(解放军总医院 1中医科, 3病理生理研究室, 北京 100853； 2中国中医科学院西苑医院,北京100091)

西洋参茎叶总皂苷(Panaxquinquefoliumsaponins, PQS) 是西洋参茎叶中主要的活性成分。以往实验研究表明，PQS具有减轻缺血/再灌注(ische-mia/reperfusion, I/R)诱导的心肌细胞凋亡、心律失常和改善梗死后心室重构等作用[1-3]，其机制可能与增强抗氧化酶活性、维持细胞内Ca2+稳态等有关[4]。

研究表明钙超载是I/R发生的关键环节，钙调神经磷酸酶(calcineurin，CaN)是唯一依赖于Ca2+及钙调素(calmodulin，CaM)调控的蛋白丝氨酸/苏氨酸磷酸酶，参与多种细胞功能的调节[5]。PQS又具有维持细胞内钙稳态的作用[4]。我们研究证实PQS可以减轻离体培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤[6-7]。那么，PQS减轻心肌细胞H/R损伤的机制是否与CaN有关尚缺少研究，本部分工作利用乳鼠心肌细胞缺氧/复氧 (hypoxia/reoxygenation, H/R) 模型通过转染pCDB-CaN质粒或CaN特异性抑制剂FK506干扰CaN表达，以探讨PQS减轻心肌细胞H/R损伤的机制。

材　料　和　方　法

1动物与试剂

清洁级24 h内新生SD乳鼠，购自北京市军事医学科学院实验动物中心；PQS粉剂由吉林省集安益盛药业股份有限公司提供；细胞CaN活性比色法定量检测试剂盒购自GenMed；低糖DMEM干粉、购自Gibco；新生牛血清(new-born calf serum, NCS)购自PAA；胰蛋白酶购自Amresco；蛋白酶抑制剂(protease inhibitor cocktail)、苯甲基磺酰氟(phenylmethyl sulfonylfluoride，PMSF)、四甲基乙二胺(tetramethyl ethylene diamine，TEMED)、Tris碱、Tris-HCl、十二烷基硫酸钠(sodium dodecyl sulphate，SDS)、考马斯亮蓝G250、过硫酸铵、甘氨酸、亮肽酶素和Triton X-100购自Sigma；牛血清白蛋白(bovine serum albumin, BSA)、β-巯基乙醇购自Merck；蛋白电泳分子量(7～175 kD)为Bio-Rad产品；兔抗人GAPDH单克隆抗体、兔抗人Bax、 Bcl-2和CaN多克隆抗体购自Cell Signal；辣根过氧化酶标记山羊抗兔IgG购自Santa Cruz；增强化学发光(enhanced chemiluminescence, ECL)试剂盒购自Millipore；……