HPLC法测定华凤仙药材中没食子酸的含量

刘佳丽蔡威黔陈 颖

HPLC法测定华凤仙药材中没食子酸的含量

刘佳丽1蔡威黔1陈 颖2

目的建立华凤仙药材中没食子酸的HPLC含量测定方法，为评价华凤仙药材的质量提供理论参考。方法采用HPLC法测定华凤仙药材中没食子酸的含量，色谱条件为：C18色谱柱（4.6mm×250mm，5μm)，流动相为乙腈-0.1%磷酸(5：95)，流速为1.0ml/min，检测波长为273nm。结果没食子酸进样量在0.053～0.795μg范围呈良好的线性关系(r=0.9996)，平均回收率为101.76%，RSD为1.90% (n=6)。药材中没食子酸的平均含量为0.18mg/g。结论本测定法快速、简便、灵敏度高、重现性好，可用于华凤仙药材的质量控制研究。

华凤仙；HPLC；没食子酸

华凤仙（Impatiens chinensis Linn.）分布于广东、广西、浙江、江西、福建、云南等地，又称水凤仙、水指甲花、象鼻花等。具有清热解毒、活血散瘀、消肿拔脓的功效，用于治疗发热、咳嗽、咳痰、肺结核、跌打损伤、瘀血疼痛；外用治蛇头指疮、痈疮肿毒等病症，为广西民间常用中草药[1]，并收录在《广西中草药》药材标准中。目前有关华凤仙药材的质量控制方面报道甚少，仅在测定总黄酮方面有报道[2]，由于该药材在广西民间使用证明具有较好的疗效，常用于治疗发热、咳嗽等，应用较广泛。然而现在很多民间医生只是靠一些积累的经验来判断华凤仙药材的真伪，这样在使用上很大程度上会有偏差，安全用药就得不到保障，也在一定程度上限制了华凤仙药材的制剂开发；且现代药理研究表明，没食子酸单体成分具有较强的体外抑菌作用[3]，与治疗发热、咳嗽等的疾病相一致，为了保证该药材的质量，必须要制订相关的质量控制标准。本文采用HPLC法测定华凤仙药材中指标成分没食子酸的含量，为华凤仙药材的质量控制提供科学依据，为进一步研究该药材药效物质打下基础[4-7]。

1 仪器与材料

Agilent1100高效液相色谱仪（美国安捷伦科技公司）；Hypersil ODS2 C18柱(5μm，4.6mm× 250mm)；没食子酸对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号110831-200803）；水（超纯水）；甲醇、乙腈为色谱纯（Fisher）；其他试剂均为分析纯。华凤仙药材（批号为20101103、20101216、20110627）采于广西南宁市高峰林场，鉴定为凤仙花科（Balsaminaceae）植物华凤仙（Impatiens chinensis Linn.）的根、茎、叶和花全株。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱为Hypersil ODS2 C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为乙腈-0.1%磷酸（5：95）；检测波长为273nm；流速为1.0ml/min。理论塔板数按没食子酸计应不少于3000。

2.2 对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品适量，加水使溶解并稀释成每1ml含53µg的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备称取华凤仙药材（批号为20101103）粗粉约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入水50ml，密塞，称定重量，超声处理30min，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.4 方法学考察

2.4.1 标准曲线的绘制精密吸取对照品溶液1.0、3.0、6.0、9.0、12.0、15.0μl，注入高效液相色谱仪，进行测定，以对照品进样量（μg）为横坐标，对应峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得回归方程y=239638x +21482（ r=0.9996），表明没食子酸进样量在0.053～0.795μg范围内与峰面积呈良好线性关系。以水溶剂作为空白对照。对照品、供试品、空白对照的色谱图见图1。

图1 HPLC色谱图

2.4.2 精密度实验精密吸取对照品试液10µl，连续进样6次，按“2.1”色谱条件下分别测其峰面积，日内精密度RSD值为1.05%（n=6）。同法测定日间精密度RSD值为1.69%（n=6），表明所用仪器精密度良好。

2.4.3 重复性实验取华凤仙药材（批号为20101103）粗粉约2g，共6份，精密称定，按“2.3”项下的方法制备成供试品溶液，在“2.1”项下色谱条件下，分别进样10μl注入高效液相色谱仪进行测定，药材中没食子酸的平均含量为0.15mg/g，RSD为1.30%（n=6），表明方法重现性良好。

2.4.4 稳定性实验取华凤仙药材（批号为20101103）粗粉约2g，精密称定，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，常温下放置，在“2.1”项下色谱条件下，分别在放置0，4，8，12，16，24h后进样10μl注入高效液相色谱仪测定峰面积，峰面积的RSD值为1.52%（n=6），表明供试品溶液在24h内稳定。

2.4.5 加样回收试验取已知含量华凤仙药材（批号为20101103）粗粉约1g（含量为0.15mg/g），精密称定，共9份，按高、中、低三个量级，分别精密加入没食子酸对照品溶液适量，按“2.3”项下的方法平行制备9份供试品溶液，在“2.1”项下色谱条件下，进样10μl注入高效液相色谱仪测定分别测定含量，计算回收率，平均回收率为101.79%，RSD为1.90%（n=9）。结果见表1。

表1 加样回收试验结果

2.5 样品含量测定称取三批华凤仙药材粗粉各2g，精密称定，平行三次，按“2.3”项下的方法制备供试品溶液，在“2.1”项下色谱条件下，分别进样10μl进行测定，以峰面积计算没食子酸的含量。结果见表2。

表2 三批华凤仙药材中没食子酸含量测定结果（n=3）

3 讨论

本实验首次对华凤仙药材中没食子酸的含量进行了HPLC分析，参考文献[3-6]比较了甲醇、乙醇-水、水等多种溶剂作为提取溶剂，经过HPLC分析，甲醇和乙醇-水作为提取溶剂时，杂质干扰比较严重，且提出量较少，最后选择水作为没食子酸的提取溶剂，该溶剂廉价、无毒、提取效果好。比较甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%磷酸、乙腈-0.1%磷酸等多种流动相及不同的比例，最后确定乙腈-0.1%磷酸（5：95）作为该含量测定的流动相，在该流动相下，没食子酸指标成分达到基线分离，分离度符合要求。本实验测定了不同采收时间的三批华凤仙药材中没食子酸的含量，平均含量为0.18mg/g，为了更好的研究华凤仙药材中没食子酸的含量，今后将从不同产地、不同采收时间等多角度收集样品，同时开展指纹图谱等相关的研究，为科学有效地控制该药材的质量提供参考，进一步研究该药材药效物质打下基础。

本实验所采用方法快速、简便、准确、灵敏度高、重现性好，可用于华凤仙药材的含量测定，对于华凤仙药材的质量控制和进一步研究该药材具有参考意义。

[1] 江苏新医学院.中药大辞典.上册[M].上海：上海科学技术出版社,1985：917-918.

[2] 彭定基,李兵,陈晓丽.华风仙总黄酮的含量测定[J].广西中医学院学报,2010,13(1)：54-55.

[3] 韦建华,卢汝梅.周媛媛.草龙提取物及化学成分的抗菌活性研究[J].时珍国医国药,2011,22(6)：1449-1450.

[4] 何依玲,李晓誉.高效液相色谱法测定铁苋菜中没食子酸含量[J].中国药业,2007,16(11)：18-19.

[5] 张朔生.HPLC测定炮制前后石榴皮中没食子酸的含量[J].药物分析杂志,2010,30(6)：1104-1106.

[6] 金欣,王峰,姚岚,等.HPLC测定野老鹳草中没食子酸和鞣花酸的总量[J].中成药,2010,32(7)：1172-1176.

[7] 史伟国,王丽敏,刘翠娟,等.地榆不同部位没食子酸的含量测定[J].黑龙江医药科学,2011,34(1)：14-15.

Determination of the Content of Gallic Acid in the Impatiens Chinensis by HPLC

Liu Jiali Cai Weiqian Chen Ying

ObjectiveEstablished HPLC methods for the determination of the Impatiens chinensis and provide theoretical reference for the control of the quality of the Impatiens chinensis.MethodsHPLC were adopted to determine effective contents of gallic acid of the Impatiens chinensis.Hypersil ODS2 C18(4.6mm×250mm, 5μm) column as analytic column, with mobile phase consisted of acetonitrle-0.1% phosphoric acid (5∶95).The flow rate was 1.0 ml/min. The detection wavelength was 273 nm.ResultsThe liner range of gallic acid was 0.053～0.795μ g(r=0.9996). The average recovery was 101.76%, RSD was 1.90% (n=6).ConclusionThis method is fast, easy, high sensitivity, good reproducibility, and can be used for the quality control study of the Impatiens chinensis.

Impatiens chinensis; HPLC; Gallic acid

R927.2

A

1673-5846(2013)02-0061-03

1 龙岗区人民医院，广东深圳 518172

2 广东食品药品职业学院，广东广州 510520

刘佳丽，女，本科学士，主管药师。E-mail：14554055@qq.com。

蔡威黔，男，硕士研究生，主任药师。E-mail：weiqiancai@21cn.com。