白蚁mtDNA提取方法改良及检测
2013-05-13 02:35:32姜丽红邹湘武宁涤非席在星
湖南文理学院学报(自然科学版)
2013年1期
姜丽红, 邹湘武, 宁涤非, 席在星
白蚁mtDNA提取方法改良及检测
姜丽红*1, 邹湘武1, 宁涤非1, 席在星2
(1. 常德市白蚁防治所, 湖南 常德, 415000; 2. 湖南文理学院 生命科学学院, 湖南 常德, 415000)
利用mtDNA多态性进行种类鉴定是一种分子生物学常用方法, 从DNA水平对白蚁进行物种鉴别并探讨物种的进化, 其必要前提是提取到一定数量和质量的mtDNA. 在分离得到线粒体后, 分别采用CTAB、SDS 2种方法提取mtDNA. 紫外分光光度计检测DNA纯度及浓度, 用mtDNA 特异性引物进行PCR 扩增检测. 试验证明2种方法均能成功提取白蚁的mtDNA, SDS法提取效果较好.
白蚁; mtDNA提取; CTAB; SDS
白蚁(), 亦称虫尉, 属节肢动物门, 昆虫纲, 等翅目, 属于较低级的半变态昆虫[1]. 白蚁体软而小, 通常长而圆, 白色、淡黄色、赤褐色直至黑褐色. 主要分布于热带和亚热带地区, 以木材或纤维素为食. 全世界已知白蚁种类约3 000余种. 根据黄复生记述, 除了澳白蚁科没有发现外, 中国白蚁隶属4科44属476种[1], 其中散白蚁属种类最多, 超过100种. 白蚁分布范围很广, 约占全国陆地总面积的35%～40%.
线粒体DNA是染色体核外遗传物质, 动物线粒体DNA(mtDNA)为共价闭合环状的双链DNA[2],分子量为15～18 kb, 属于单倍体, 且具有相对自主性, 变异快, 结构相对简单, 经母系遗传, 对真核生物基因组的结构、复制、转录、调控机理等方面都起着重要作用. 近年来被广泛用于近缘种间或种内种群间亲缘关系的研究.
本研究比对分析了用CTAB法和SDS法提取mtDNA技术, 用mtDNA 特异性引物进行PCR 扩增检测, 以期找到提取白蚁mtDNA最佳方法.
1 材料与方法
1.1 主要试……
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