人脂肪间充质干细胞的原代培养及体外成骨成脂诱导分化

闵敏，张雪静，马红，许辉，李遇梅

(1.江苏大学附属医院皮肤科，江苏 镇江 212001;2.镇江市第二人民医院皮肤科，江苏 镇江 212002)

对于间充质干细胞的研究，最初的对象是骨髓间充质干细胞，并且已经形成了成熟的分离培养方法［1］。但是，近年来，人们逐渐将干细胞的研究重点转向脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells，ADSCs)，因其在组织来源，分离方法等方面显示出优越性［2］，现已被广泛应用于科研和临床研究中。人脂肪间充质干细胞是由Zuk等［3］首次从人抽脂手术中分离获得，具有很强的增殖和多向分化能力。在临床研究中，脂肪间充质干细胞在细胞移植及组织工程等方面也有着广泛的应用前景［4］。本实验试图探索高效获得专一性未分化的人脂肪间充质干细胞的方法，并对其生物学特性及分化特性作进一步观察。

1 材料和方法

1.1 临床标本

人脂肪组织来源于10例产科剖宫产手术者的腹部皮下脂肪，年龄23～35岁，平均为30岁，体质量指数22～24 kg/m2。所有产妇健康状况良好，无系统性疾病，术前均签订知情同意书，并经医院伦理委员会通过。

1.2 试剂与仪器

Ⅰ型胶原酶购自美国 Sigma公司。低糖DMEM、高糖 DMEM、胎牛血清购自美国 Gibco公司。噻唑蓝(MTT)购自美国Amersco公司。碘化丙啶(PI)购自美国 BD公司。鼠抗人 CD31-FITC、CD34-PE、CD45-PE、CD29-FITC、CD44-FITC、CD73-FITC购自美国Biosciences公司，鼠抗人CD105-PE、CD166-PE购自美国Biolegend公司。地塞米松、抗坏血酸、β-甘油磷酸钠、吲哚美辛、异丁基甲基黄嘌呤(IBMX)以及胰岛素均购自美国Sigma公司。Trizol购自美国 Invitrogen公司。反转录试剂盒及SYBR-PCR试剂盒购自TaKaRa公司。酶联免疫检测仪为澳大利亚Clinibio公司产品。流式细胞仪为美国BD公司产品。……