Galectin-3、ret、nm23-H1蛋白与喉癌浸润转移的关系※

张瑞迪 王乐秋 张立晨 李丽娟 马秀凤

Galectin-3、ret、nm23-H1蛋白与喉癌浸润转移的关系※

张瑞迪 王乐秋 张立晨 李丽娟 马秀凤

目的研究Galectin-3、ret、nm23-H1蛋白与喉鳞状细胞癌（LSCC）的肿瘤浸润、转移的关系。方法应用免疫组织化学SP法，检测30例LSCC标本癌组织中Galectin-3、ret及nm23-H1蛋白的表达情况。结果Galectin-3、ret在LSCC不同病理分化组间的表达差异均有统计学意义（P＜0.05），nm23-H1的表达差异无统计学意义；此三种蛋白在不同的临床分期及有无淋巴结转移组间比较差异均有统计学意（P＜0.05）；nm23-H1的表达与Galectin-3、ret的表达呈负相关，Galectin-3与ret的表达无明显相关（P＞0.05）。结论Galectin-3、ret、nm23-H1与LSCC的浸润、转移密切相关。

喉鳞状细胞癌；Galectin-3； ret；nm23-H1

喉癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一，肿瘤的局部复发、淋巴结转移和远处转移是影响喉癌患者预后的重要因素。本研究通过观察喉癌组织、和转移灶中原癌基因ret蛋白、肿瘤转移抑制基因nm23-H1蛋白、内源性凝集素Galectin-3的表达情况，了解ret蛋白、nm23-H1蛋白和Galectin-3与喉癌病理分化程度、临床分期及淋巴结转移之间的关系。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料收集2011年8月～2012年8月期间来我院我科手术切除并经病理学检查确诊的原发性LSCC标本30例，其中男28例，女2例，年龄38～73岁，平均（52.1±6.3）岁，根据2002年国际抗癌协会（UICC）分期方案行临床分期分组：Ⅰ～Ⅱ期18例，Ⅲ～Ⅳ期12例；分化程度分组：高分化7例，中分化14例，低分化9例；有否淋巴结转移分组：有转移16例，无转移14例。病例术前均未做过放射治疗和化学治疗，患者签订知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂兔抗人nm23多克隆抗体（即用型）、兔抗人ret单克隆抗体和兔抗人Galectin-3单克隆抗体购自武汉博士德公司，SP试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.2.2 免疫组织化学方法临床标本组织取得后由病理科常规石蜡包埋、切片，行HE染色及Galectin-3、ret、nm23-H1抗体免疫组化S-P法染色。

1.2.3 结果判定由病理科医生对所有切片进行双盲阅片及记录，阳性为细胞质中有棕褐色颗粒染色。阴性为对照组黏膜细胞着色。于高倍镜下每张切片随机抽取10个不重复视野计数200个细胞（对极少数不足10个高倍视野的，以观察到的最多高倍视野计算均值），根据阳性细胞所占百分比分别记录为不同结果如：阳性细胞数＜10%为阴性，≥10%为阳性。

1.3 统计学处理用SPSS 13.0软件分析，用χ2检验及确切概率法，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 喉癌临床病理表现与Galectin-3、ret、nm23-H1蛋白的关系在LSCC不同分化程度各组中，Galectin-3在高分化组与中分化组、低分化组间比较差异有统计学意义（P＜0.05），ret在组间两两比较差异均有统计学意义（P＜0.05），ret的表达与分化程度成负相关，低分化组中表达明显高于中分化组；nm23-H1的表达在组间两两比较差异无统计学意义（P＞0.05）。在不同临床分期各组中，Galectin-3的表达在各分期间比较差异有统计学意义（P＜0.05），成正相关；ret、nm23-H1蛋白表达在Ⅰ～Ⅱ期组与Ⅲ～Ⅳ期组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。Galectin-3、ret、nm23-H1的表达在有无淋巴结转移组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05），且有淋巴结转移组表达率明显高于无淋巴结转移组，见表1。

2.2 nm23-H1表达与Galectin-3、ret表达的相关性在喉癌组织中nm23-H1的表达与Galectin-3（P＜0.05）、ret（P＜0.05）的表达呈负相关，Galectin-3与ret在喉癌组织中的表达无明显相关（P＞0.05）。

表1 喉癌中相关基因表达与各临床病理指标的关系

3 讨论

凝集素（Lectin）被广泛发现于植物及动物组织中，其通过参与或交联特异的糖结合物，在调节生理过程中扮演了很重要的角色。Galectin-3是唯一的嵌合体凝集素，已知Galectin-3调节相当大一部分细胞的生物学过程，尤其是抑制凋亡和促进细胞增殖[1]。近年来的大多数研究表明，Galectin-3过表达与一些肿瘤发生、发展、侵袭、转移及预后密切相关，即随着Galectin-3的表达水平升高，肿瘤易发生侵袭、转移及预后不良，与国内外学者的研究结果部分一致[2]。本研究结果显示Galectin-3在LSCC不同病理分化程度中，高分化组与中分化组、低分化组间比较差异有统计学意义（P＜0.05）。由此可见，Galectin-3表达与LSCC组织分化程度密切相关，组织分化程度高，恶性程度低，其蛋白低表达；表达或表达强者多见于组织分化程度低，恶性程度高的LSCC，提示在诱导LSCC分化过程中Galectin-3起重要作用。且本实验中Galectin-3在临床Ⅲ～Ⅳ期组及淋巴结转移组表达率明显高于其对应对照组，其之间的差异有统计学意义，表明Galectin-3高表达与LSCC的发生、发展、浸润、转移密切相关。

ret原癌基因位于10q11.2，编码一种酪氨酸激酶受体[3]，ret蛋白由胞膜外配体结合区、跨膜区和胞内酪氨酸蛋白激酶功能区组成，其中胞膜外区分为半胱氨酸富集区和钙粘着蛋白样配基结合区两部分，与细胞间的信号转导有关。ret原癌基因对神经内分泌系统、肾脏的发育，对调节神经嵴细胞的增殖、分化、迁移及肠神经系统的发育都起着重要的作用。在神经生长、分化、成熟中起重要作用[4]。本实验结果显示，ret蛋白的表达随着LSCC分化程度的降低而增加，中分化组中表达明显低于低分化组（P＜0.05），提示ret在诱导肿瘤分化过程中起重要作用。本研究还显示，在各临床分期间及有无淋巴结转移组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05），由此可见，ret蛋白的表达与LSCC的淋巴结转移及临床分期相关，随淋巴结转移及临床分期的增加，ret蛋白阳性表达率逐渐升高，提示ret蛋白在LSCC的发展、侵袭转移过程起重要作用。其机制可能为由于激活性异源基因使癌蛋白形成二聚体引起TK区功能的组成性激活，跨膜区的丢失改变了ret癌基因的细胞内定位，允许这些癌蛋白与异常的底物相互作用，同时ret与普遍表达的异源基因融合而改变了启动子，使得在正常喉黏膜组织细胞内静止的ret开始表达，激发酪氨酸激酶自动磷酸化，诱导细胞增生过度以至癌变。

nm23基因（Nometastatic gene 23）是1988年Steeg等[5]在研究小鼠黑色素瘤K-1735的亚细胞克隆株以及化学诱导大鼠乳腺癌细胞时发现的一种cDNA基因。小鼠和人中nm23基因均编码为分子量为17kD的核内及胞浆蛋白质，人类nm23基因的两个亚型nm23-H1和nm23-H2均位于17号染色体长臂17q 21～3处，分别编码18.5kD和17kD两种蛋白。而转移抑制功能主要由 nm23-H1 和nm23-H2 体现，其中nm23-H1基因与肿瘤的侵袭转移最为密切。本实验结果显示，nm23-H1表达在不同分化程度组间两两比较差异无统计学意义（P＞0.05），在各分期间及有无淋巴结转移组间比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。由此可见，nm23-H1的表达与LSCC的病理分化程度无明显相关性。与转移及临床分期呈相关性。即随着nm23-H1表达水平的降低，LSCC表现出临床分期晚以及更易发生转移的特点，与国内外学者报道一致。综上所述，nm23-Hl表达的缺失或失活与LSCC的临床分期及淋巴转移密切相关，尤其在反映LSCC向邻近器官侵犯和淋巴转移方面有重要价值。

在恶性肿瘤相关的癌基因研究中，许多学者提出了基因协同作用的假说，认为在恶性肿瘤发生、发展和转移的各个阶段，至少有两个或两个以上的功能各异且异常激活的基因各自发挥不同作用，并在发生先后及发生位置上相互配合，共同促进了细胞的癌变。本实验结果显示nm23-H1的表达与Galectin-3、ret的表达呈负相关，Galectin-3与ret的表达无明显相关（P＞0.05）。总之，Galectin-3、ret和nm23-H1蛋白在LSCC中的不寻常表达，导致细胞无限增殖和细胞凋亡受阻，在喉癌的发生和发展过程中发挥重要作用。联合检测Galectin-3、ret及nm23-H1蛋白可能成为LSCC早期诊断及判断恶性程度的指标之一。可指导临床准确估计LSCC的侵袭性和淋巴转移趋势，并有助于选择适宜的治疗方案以及评估预后。

[1] Miranda FA, Hassumi MK, Guimaraes MC, et al. Galectin-3 overexpression in inasive laryngeal carcinoma, assessed by computer-assisted analysis[J]. J Histochem Cytochem, 2009,57(7)：665-673.

[2] Sakaki M, Fukumori T, Fukawa T, et al.Clinical significance of Galecyin-3 inc-ear cell renal cell carcinoma[J]. J Med Invest, 2010, 57(1-2)：152-157.

[3] 贾万钧,郭艳.CK19、gal-3、HBME-1和Ret蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达[J].浙江临床医学,2007,9(11)：1443-1444.

[4] Drosten M, Putzer BM.Mechanisms of Disease, cancer targeting and the impact of oncogenic RET for medullary thyroid carcinoma therapy[J]. Nat Clin Pract Oncol, 2006,3(10)：564-574.

[5] 符生苗.鼻咽癌nm23-H1基因外显子的检测[J].医学研究杂志, 2007,36(9)：30-32.

R34

A

1673-5846(2013)06-0289-03

牡丹江医学院红旗医院耳鼻咽喉科，黑龙江牡丹江 157011

黑龙江省卫生厅科研课题项目（项目编号：2011-301）

王乐秋，女，现任牡丹江医学院红旗医院耳鼻咽喉科主治医师，硕士，主要从事耳鼻咽喉临床研究，E-mail：mdjwangleqiu@163.com。