EBVaGC中LMP1和BHRF1的表达与血管生成淋巴管生成的关联性研究

张 伟 王爱亮 崔 凯 孙 静 李 胜△

（1济南大学山东省医学科学院医学与生命科学学院，山东 济南250062；2山东省肿瘤防治研究院，济南250117；3济宁医学院附属医院，山东 济宁272029）

EB病毒（Epstein－Barr virus，EBV）与人类多种恶性肿瘤有关，例如Burkitt淋巴瘤（BL）、Hodokin病（HD）、鼻咽癌（NPC）及胃癌（GC）等［1］，胃癌细胞内存在EBV者定义为EBV相关性胃癌（EBVaGC）。EB病毒潜伏膜蛋白基因（LMP1）和EB病毒早期编码基因（BHRF1）是公认的病毒致癌基因，EBV编码的BHRF1蛋白在约90%EBVaGC组织中可检测到，但未发现LMP1的表达［2－3］。因此，我们收集EBV相关胃癌组织，利用免疫组化方法检测LMP1、BHRF1、血管内皮生长因子（VEGF－C）、淋巴细胞内皮标记物（LYVE－1）和高度糖基化的i型跨膜糖蛋白（CD34）的表达情况，探讨与临床病理的关系，从而初步了解其在EBVaGC中发生的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

所有患者均来自山东省籍贯并且三代居住在山东省内的当地汉族人群。所有病例均取自山东省肿瘤防治研究院和济宁医学院附属医院病理科2008年至2012年的手术标本，采用标本均签署知情同意书。胃癌手术切除的胃癌组织标本600例（含石蜡包埋组织），选取经原位分子杂交检测鉴定EB病毒相关性胃癌30例。

1.2 方法

1.2.1 病理标本处理 标本经10%中性缓冲福尔马林固定、石蜡包埋。所有标本均以4μm连续切片，LMP1、BHRF1、VEGF－C、LYVE－1和CD34单克隆抗体按1∶200稀释，以下操作步骤按试剂盒说明进行，最后DAB（二氨基联苯胺）显色，常规复染封片。用已知的阳性切片作阳性对照，以PBS代替上述抗体作阴性对照。其中一张用苏木精－伊红染色，光镜观察进行组织病理学分类。

1.2.2 免疫组织化学（SP法） 我们应用过氧化物酶标记的链霉素（Streptavidin Peroxidase，SP）免疫细胞化学方法对上述标本中LMP1、BHRF1、VEGF－C、LYVE－1和CD34的表达水平进行检测。……