C1QBP在单核细胞THP-1趋化运动中的作用

岳 丹，苑 博，齐 灿，冯香梅，刘运德，王 勇，

(1天津医科大学医学检验学院，天津300203;2天津医科大学第二医院)

趋化运动是指细胞能够感受到环境中化学分子的浓度梯度，并沿着浓度梯度的方向所做的定向运动［1］，它与机体的免疫应答及肿瘤转移等密切相关。C1QBP是一种多功能伴侣蛋白，广泛分布于线粒体、细胞核、细胞质、高尔基体及细胞膜上，并能够被分泌到细胞外基质中，其生理功能可能包括参与细胞内分子运输、连接不同细胞器以及细胞器和细胞膜之间的信号传导［2］。为探讨炎症性疾病的发病机制和肿瘤治疗的理论依据，2011年3月～2013年6月，我们对C1QBP在单核细胞中的表达及对细胞趋化运动的影响进行了研究。

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 细胞株 人急性单核白血病细胞(THP-1)，小鼠白血病巨噬细胞(RAW264．7)和人乳腺癌细胞(MDA-MB-231)均购自美国ATCC细胞库;THP-1细胞用RPMI-1640培养基，RAW264．7和MDA-MB-231细胞用DMEM培养基。

1．1．2 试剂及抗体 Lipofectamine2000购自 Invitrogen公司，CSF-1购自美国BD公司，趋化小室、聚碳酸脂膜购自Neuro Probe公司，纤连蛋白(Fibronectin)购自Sigma公司，BCA测定试剂盒购自Pierce公司，C1QBP抗体、PKCζ抗体、β-actin抗体、辣根过氧化物酶标记的IgG二抗均购自美国Santa Cruz公司，鬼笔环肽(phalloidin)购自 Molecular Probe公司，蛋白A琼脂糖(Protein A Agarose)和蛋白G琼脂糖(Protein G Agarose)购自Invitrogen公司，其他试剂均为国产分析纯产品。

1．2 方法

1．2．1 C1QBP、PKCζ在细胞中的表达检测 预冷的1×SDSlysis buffer(或RIPA裂解液)裂解细胞，提取总蛋白，BCA法测定总蛋白浓度。取30μg蛋白进行SDS-PAGE电泳，半干转印法将凝胶上的蛋白转印至PVDF膜上。用含5%脱脂奶粉的TBST溶液室温封闭1 h，兔源抗C1QBP、PKCζ、鼠源抗βactin一抗4℃孵育过夜。辣根过氧化物酶标记的IgG二抗室温孵育1 h，ECL化学发光法显影。……