多功能G3BP应激蛋白的红色及蓝色荧光标记

高星杰 ，葛 林 ，付 雪 ，张 毅 ，宋 娟 ，何津岩 ，姚 智 ,3，杨 洁 ,

（天津医科大学1.基础医学研究中心；2.生物化学系；3.免疫学系，天津300070）

G3BP是一种能够与GAP（the Ras-GTPase-activating protein）的 SH3（Src Homology 3）结构域结合的胞浆蛋白[1]，它在机体发育、细胞周期调控、信号传导通路、应激颗粒及相关疾病的发生发展过程中发挥重要作用。本实验即是在绿色荧光标记的G3BP蛋白基础上，利用pmCheery-C1/pEBFP-N1质粒载体，进一步进行红色与蓝色荧光标记，从而实现活细胞内对于该蛋白的三色荧光标记，有助于进行细胞荧光方面的研究，为深入研究此蛋白的生物学功能提供便利工具。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 质粒、菌株及细胞 真核表达质粒pEGFPC1-G3BP由Jamal Tazi博士馈赠；pmCherry-C1载体由Johan Perane博士馈赠；pEBFP-N1载体购自美国Clontech公司；Tran1-T1感受态细胞购自北京全式金生物技术有限公司；HeLa细胞来自本实验室。

1.1.2 酶类及主要生化试剂 限制性内切酶EcoRI、BamHI及T4 DNA连接酶均购自Fermentas公司；Taq酶购自北京鼎国昌盛生物技术公司；T/A载体（pEASY-T1）购自北京全式金生物技术有限公司；B型小量DNA快速回收试剂盒购自北京博大泰克生物基因技术有限公司；质粒快速小提试剂盒购自北京索来宝科技有限公司；去内毒素质粒提取试剂盒购自 Promega公司；Lipofectamine 2000购自Invitrogen公司。BCA蛋白测定试剂盒购自Pierce公司；鼠源抗BFP单克隆抗体购自MBL公司；鼠源抗G3BP单克隆抗体购自Abcam公司；辣根过氧化物酶标记的抗鼠源IgG二抗购自Fermentas公司；LumiGLo化学发光底物购于KPL公司；细胞荧光封片液（含DAPI染料）购自Santa公司。

1.1.3 其它 激光共聚焦荧光显微镜（基础医学研究中心）购自日本Olympus公司；引物合成及基因测序工作由北京天一辉远公司完成。……