转录调节因子p8分泌表达载体的构建及在Fx293细胞中的表达

薛珊珊，王晓洋，李 丁，牛 卿，马振毅

（天津医科大学基础医学院1.免疫学系；2.生物化学与分子生物学系，天津300070）

近年来在实体肿瘤细胞转移研究中发现，p8由于其潜在的多方面功能而逐渐引起了重视。p8/NUPR1（Nuclear protein 1）/com-1（candidate of metastasis-1）是一个只有82个氨基酸的转录调节因子，没有稳定的二级结构。p8基因剪切后形成亚型a或亚型b。迄今为止，关于p8的生物化学和分子生物学研究都是集中于亚型b，所以通常p8指的是亚型b。长亚型a比短亚型b多了18个氨基酸，这个外加的18个氨基酸的功能尚不完全清楚。在多种应激条件下p8可以被诱导表达，其生物学功能似乎和细胞所处的内外环境相关，比如可以诱导肿瘤细胞生长和转移[1-3]或抑制肿瘤的生长[4-5]，也有实验证实p8和内质网胁迫诱导的细胞自噬相关[6]。在不同的组织中，p8功能也不同，甚至功能相反。在胰腺癌和乳腺癌细胞中，p8与肿瘤细胞的凋亡呈负相关[7]，其具体功能不详，而且p8可以作为一种潜在的药物靶点抑制肿瘤细胞的生长和转移。本实验针对p8进行亚克隆，通过缺陷病毒体外产生分泌蛋白，用于体外结合蛋白分子的鉴定，为研究p8的生物学功能提供实验工具。

1 材料与方法

1.1 主要仪器和试剂 CO2培养箱（Thermo），蛋白质电泳仪器（Bio-Rad），倒置荧光显微镜（上海长方光学仪器厂），低温高速离心机（Eppendorf）。细胞系与培养条件：慢病毒包装细胞Fx细胞来自本实验室，细胞在37℃、5%CO2、饱和湿度下用含有10%胎牛血清的DMEM培养基培养。质粒pDisplay（Invitrogen，V660-20），慢病毒包装系统来自本实验室。限制性内切酶来自New England Biolabs Inc.，E.coli DH5α和质粒提取试剂盒购于原平皓试剂有限公司。……