在线衍生-高效液相色谱法同时测定血浆中的色氨酸及其代谢物

冯成亚，高洁莹，甄乾娜，樊子勉，朱明松，杨香春，丁敏*

(1.重庆医科大学检验医学院，临床检验诊断学教育部重点实验室，重庆 400016;2.重庆医科大学附属第一医院内分泌内科，重庆 400016)

色氨酸(tryptophan，Trp)作为人体内的一种必需氨基酸，不仅可合成蛋白质，还能在不同组织中代谢为多种生物活性分子。在脑中Trp 主要通过色氨酸羟化酶(TPH)的作用生成5-羟色胺，5-羟色胺在单胺氧化酶的作用下转化为5-羟吲哚乙酸(5-hydroxyindole acetic acid，5-Hiaa);在脑外Trp 主要经色氨酸-2，3-双加氧酶(TDO)或吲哚胺-2，3-双加氧酶(IDO)的作用生成甲酰犬尿氨酸，甲酰犬尿氨酸经犬尿氨酸甲酰胺酶代谢为犬尿氨酸(kynurenine，Kyn)，Kyn 通过犬尿氨酸氨基转移酶的作用代谢为犬尿喹啉酸(kynurenic acid，Kyna)［1］。肿瘤、肾衰竭、感染性疾病、神经性疾病等均存在色氨酸代谢紊乱［2-7］。Kyn/Trp 可间接反映IDO 活性和细胞免疫状态［8］。色氨酸及其代谢物的分析方法常用高效液相色谱法(HPLC):其中Trp和Kyn 采用紫外检测［9-12］，Kyna 采用荧光检测［13，14］，而5-Hiaa则用荧光或电化学检测［15-17］。目前尚未检索到同时测定血浆Trp、Kyn、Kyna和5-Hiaa的方法。本研究采用醋酸锌在线衍生及程序波长的高效液相色谱技术同时分离和测定Trp 及其3种代谢物，利用3-硝基酪氨酸(3-nitrotyrosine，3-N-Tyr)为内标(IS)定量，提高了分析的可靠性和准确性。该方法操作简便，快速，灵敏，成功应用于孕妇血浆中Trp的代谢分析。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Agilent 1100型高效液相色谱仪(配有G1314A型紫外检测器及G1321A 型荧光检测器)购自美国Agilent 公司;HIMAC-cf 15低温台式离心机(日立工机株式会社);ShimaduLBRORAEL-200天平(日本岛津公司);Millipore 超纯水过滤装置及Millipore真空泵(美国Millipore 公司);SB-3200超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)。……