大鼠马钱子碱中毒肝细胞Bcl－2和Caspase－3蛋白表达的研究

湖北医药学院法医学教研室 （十堰442000） 雷怀成 朱方成 魏 来

马钱子主要药理作用是散结消肿、通络止痛，临床用以治疗风湿类疾病、中风偏瘫、痴呆、视网膜病变以及骨伤科、肿瘤等疾病。马钱子碱能抑制肝癌细胞生长，可能通过肝癌细胞FAS基因和蛋白表达增加，诱导肝癌细胞凋亡发挥抑制作用［1～3］。有研究表明，马钱子中毒后药物浓度在肝、肾最高。本实验采用免疫组化方法对大鼠马钱子碱中毒后的肝脏Bcl－2和Caspase－3蛋白表达进行检测，分析肝细胞Bcl－2和Caspase－3蛋白表达的变化规律，为毒理学、法医毒理病理学研究提供形态学依据。

材料与方法

1 材 料

1．1 动物：Wistar大鼠60只（湖北医药学院实验动物中心提供），雌、雄各30只，体质量为（200±10）g。大鼠喂养1周后，随机分为对照组（20只）和染毒组（40只）。采用将马钱子碱粉剂溶解于有机溶剂后，用蒸馏水稀释，按文献［2］分别给予马钱子碱233、300 mg∕kg一次性灌胃给药。染毒组动物分低、中剂量（233、300 mg∕kg）两组，每组20只；对照组用等量无离子水灌胃，正常饮食。

1．2 主要试剂：兔抗鼠Bcl－2和Caspase－3多克隆抗体由北京中杉生物技术有限公司提供；马钱子碱由十堰市药品检定所提供。

2 方 法

2．1 给药方案：染毒组分别在染毒后1、2、3、5、7 d时，颈椎脱位处死，每次处死8只。对照组分别在灌水后1、2、3、5、7 d处死，每次处死4只。取出肝脏，矢状位切开，用10%的甲醛固定。

2．2 染色步骤：石蜡切片 相邻切片1/2做常规HE染色，另1/2做免疫组织化学显色。SP法：①石蜡切片脱蜡至水；②蒸馏水冲洗，PBS浸泡5 min；③3%H2O2室温孵育5～10 min，以消除内源性过氧化物酶的活性；④5%～10%正常山羊血清封闭，室温孵育10 min。……