响应面法对牛喉管软骨多糖提取的工艺优化

陈宏硕，王维君，李晓颖，宋雪梅

（1.河北联合大学电气工程学院，河北唐山 063009；2.天津市食品加工工程中心，天津 300457）

多糖种类繁多，来源广泛，它们广泛存在于动物、植物、微生物（细菌和真菌）和海藻中。它们又可分为胞外和胞内多糖，其中研究得比较多的是植物多糖和微生物多糖。而动物软骨中除含有丰富的磷、钙、微量元素外，还含有大量的胶原蛋白和酸性粘多糖。酸性粘多糖是构成动物结缔组织的特有成分之一，植物中几乎不含有。动物软骨中起作用的主要是多糖物质，动物多糖主要由糖原、甲壳素、肝素、硫酸软骨素、硫酸皮肤素、硫酸角质素、硫酸肝素、透明质酸等复合而成[1]，本文主要针对牛喉管软骨多糖的提取工艺条件进行研究。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

牛喉管软骨、碱性蛋白酶、胰蛋白酶：均为天津市诺奥科技发展有限公司产品；硫酸软骨素abc 酶：美国sigma 公司产品；乙醇、苯酚、硫酸、咔唑、硼砂、过硫酸胺、十二烷基磺酸钠均为分析纯；乙腈、甲醇均为色谱纯。

1.2 主要仪器与设备

HW·SY21-K4 系列电热恒温水浴锅：北京长风仪器厂；PHS.3C 型pH 计：上海嘉鹏科技有限公司；高效液相色谱（HPLC）仪：日本岛津公司。

1.3 实验方法

1.3.1 多糖的提取工艺研究

工艺路线图[3-6]：组织脱脂、脱钙→加入水解酶（碱性蛋白酶，胰蛋白酶）双酶进行酶解→酶解液除蛋白（三氯乙酸→3 倍体积醋酸钾-乙醇混合液4 ℃沉淀过夜→8 000 转离心30 min，得沉淀物Ⅰ→沉淀物用0.2 mol/L 的NaCl 液溶解8 000 转离心30 min，取上清→加入0.5 mL 的十六烷基吡啶盐（5%）→离心得沉淀Ⅱ，再用2.5 mol/L 的NaCl 盐溶解→用5 倍体积的乙醇沉淀→10 000 r 离心30 min，得到多糖提取物。……