沙丁胺醇多克隆抗体的制备及间接ELISA方法的建立

张书杰，雷雅静，徐晓倩，施卫星，陈枢青

(1.浙江大学药学院药理毒理与生化药学研究所，浙江杭州310058;2.浙江大学医学院公共卫生学院，浙江杭州310058)

沙丁胺醇(salb utamol，SAL)又名咳喘宁，化学名1-(4-羟基-3-羟甲基苯基)-2-(叔丁氨基)乙醇，是一种选择性短效β2-受体激动剂，临床上用于平喘药。添加微量SAL于动物饲料中，可以增加牲畜的瘦肉量，减少脂肪量，但其毒性远高于具有相同功能的物质。近年来由于利益驱使，造成SAL的滥用，使得食品安全事件频发，这严重威胁着人们的生命安全和健康。因此，SAL残留检测问题一直受到人们的广泛关注。目前，国内外文献报道关于SAL残留检测的方法有很多，主要有HPLC、GC-MS、GC、MS-MS、薄层色谱法、酶联免疫吸附法等;其中，酶联免疫吸附检测(ELISA)因其快速、灵敏、特异性强等优点已逐渐成为环境污染小分子快速检测的主要方法之一。而此类试剂盒目前主要依赖进口，价格昂贵，因此建立快速、灵敏的ELISA检测方法很有必要。本研究通过制备沙丁胺醇多克隆抗体，建立了间接ELISA检测SAL浓度的方法，为开发快速、灵敏的ELISA试剂盒奠定了基础。

1 材料和方法

1.1 材料 沙丁胺醇购于美国SIGMA;克伦特罗购于美国 SIGMA;沙丁胺醇人工抗原(SAL-OVA)购于珠海英平生物科技有限公司;弗氏完全佐剂CFA购于美国SIGMA;弗氏不完全佐剂IFA购于美国SIGMA;对氨基苯甲酸、亚硝酸钠、氢氧化钠和盐酸均购于阿拉丁试剂;新西兰大白兔(雄)购于浙江大学动物实验中心;辣根过氧化物酶标记羊抗兔lgG抗体购于武汉博士德生物工程有限公司;酶标仪(BIO-RAD Model 680)购于北京成志科为生物科技公司。……