肿瘤坏死因子α诱导胰岛素抵抗细胞模型的建立及鉴定＊

陕西省人民医院心内科（西安710068） 朱舜明 官功昌 程 功 赵 欣 朱火兰

胰岛素抵抗（IR）不仅是2型糖尿病发病的重要病理生理机制，也是中心性肥胖、糖代谢异常、脂代谢紊乱（高甘油三酯血症和／或高密度脂蛋白降低）、微量白蛋白尿、高血压、冠心病等疾病的共同土壤。胰岛素抵抗已成为当今医学的研究热点之一。研究以3T3－L1前脂肪细胞为研究对象，通过TNF－α诱导分化成熟的脂肪细胞产生胰岛素抵抗，从而建立胰岛素抵抗细胞模型。

材料与方法

1 材 料 细胞3T3－L1前脂肪细胞系购自ATCC（American Type Culture Collection）。试 剂DMEM培养液、胎牛血清购自GIBCO公司。异丁基甲基黄嘌呤（IBMX）、地塞米松（DEX）、胰岛素（INS）、肿瘤坏死因子α（TNF－α）、cytochalasin B、牛血清蛋白购自 Sigma－Aldrich公司。3H－2－DG 购 自 GE 公 司 公司。油红 O、BCA蛋白分析试剂盒、Triton X－100购自鼎国公司。膜蛋白提取试剂盒购自Bestbio公司。PPO、POPOP购自上海化学试剂厂。二氧化碳孵箱，Thermo公司；LS 6500液态闪烁仪，Beckman公司；酶标仪，Molecular Devices公司；荧光倒置显微镜，奥林巴斯公司。

2 方 法 ①3T3－L1前脂肪细胞的培养及诱导分化：3T3－L1前脂肪细胞用高糖DMEM（含10%胎牛血清及青霉素、链霉素）作为培养基，培养条件为37℃、5%CO2的细胞培养箱，待细胞产生接触抑制后传代，调节细胞密度并接种于12孔培养板中。数天后，细胞产生接触抑制，2d后更换培养基为高糖DMEM 培养基，其中含有IBMX（0．5mM）IBMX（0．5mM）、地塞米松（1μM）和胰岛素（10μg／ml）。再过2d后，培养基更换为只含有10%胎牛血清和胰岛素（10μg／ml）。再过两天后，更换培养基为普通高糖DMEM培养基。8～12d后，大部分细胞分化为成熟的脂肪细胞。观察细胞分化过程中细胞形态的变化。②油红O染色鉴定成熟脂肪细胞：用异丙醇溶解油红O。……