右旋糖苷对生姜蛋白酶的化学修饰及其酶学性质影响

张建萍，刘恩岐*，巫永华，陈尚龙

(徐州工程学院 江苏省食品资源开发与质量安全重点建设实验室，江苏 徐州 221008)

生姜蛋白酶是继木瓜蛋白酶和菠萝蛋白酶等之后发现的一种新的植物蛋白酶，在结构和性质上与上述蛋白酶具有很多相似性，被认为是木瓜蛋白酶家族的又一新成员。但由于稳定性差、失活快，限制了其在生产中的推广应用[1]。酶分子的化学修饰是指在分子水平上改造酶蛋白，将酶蛋白的侧链基团与一些化学基团特别是具有生物相容性的大分子进行共价连接，从而改变其酶学性质，以提高酶活力、增强稳定性[2]。右旋糖苷是一种天然的大分子多糖，它由D-葡萄糖通过α-1,6糖苷键连接而成，具有良好的生物相容性和水溶性，其糖链上的醛基经活化后可与酶蛋白分子上的游离氨基共价结合[3-4]，是目前应用广泛的酶分子及蛋白质修饰剂之一。已有报道用于修饰碱性蛋白酶[5]、脂肪酶[6]、胭脂鱼胰蛋白酶[7]、Savinase蛋白酶[8]以及花生蛋白[9]等，并取得了较好的修饰效果。本实验在生姜蛋白酶分离纯化的基础上，以高碘酸钠活化的右旋糖苷对生姜蛋白酶进行化学修饰，研究化学修饰反应的最佳条件、修饰效果以及修饰前后的酶学性质变化，为生姜蛋白酶的开发利用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

新鲜生姜 徐州农贸市场；右旋糖苷(dextran40000) 日本和光纯业工业株式会社；高碘酸钠 天津基准化学试剂有限公司；磷酸二氢钾、磷酸氢二钾、亚硫酸氢钠、硼氢化钠、碳酸氢钠、三氯乙酸、十二烷基磺酸钠(SDS) 国药集团化学试剂有限公司；……