热处理对牛乳铁蛋白促成骨细胞增殖活性影响

刘 猛，杜 明*，孔莹莹，徐伟丽，宋 微，张兰威

(哈尔滨工业大学食品科学与工程学院，黑龙江 哈尔滨 150090)

乳铁蛋白(Lf)又称乳铁传递蛋白，主要存在于哺乳动物的各种外分泌物中，如乳汁、泪液或唾液等[1]。Lf可以作为一种铁强化剂调控铁的生物利用率，此外，Lf还具有多种其他生物功能，例如抗菌、抗病毒和抗氧化作用，参与机体免疫调节，增强机体抗病能力[2]等。近期，乳铁蛋白被发现具有促骨生长的功效[3-4]。诸多研究表明，Lf既能刺激成骨细胞(osteoblast，OB)增殖，促进成骨细胞增殖与分化、也能抑制破骨细胞生长与活性、诱导破骨细胞(osteoclast，OC)凋亡[5-6]。体内研究表明，乳铁蛋白在骨生长和代谢中起到一定的生理作用，能促进骨骼生长[7]。在乳品加工业中，热处理是最为常见的操作单元，然而迄今为止，热处理对乳铁蛋白活性的影响研究主要集中在抗菌活性等方面。热处理对乳铁蛋白成骨作用的影响报道很少，本实验主要研究热处理(温度和时间)对乳铁蛋白成骨活性的影响。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

SD大鼠乳鼠(72h以内)由哈尔滨医科大学第二附属医院提供。

乳铁蛋白(＞94%)、Ⅱ型胶原酶、MTT 美国Sigma公司；α-MEM培养基、胎牛血清 美国Hyclone公司；胰蛋白酶-EDTA消化液 Solarbio公司；二甲基亚砜(DMSO)、巴比妥钠 美国Gibco公司。

倒置式生物显微镜 日本Nikon公司；Eon型酶标仪 美国BioTek公司；HEPA class 100型细胞培养箱 美国Thermo公司。

1.2 方法

1.2.1 成骨细胞分离鉴定

从新生SD大鼠乳鼠中提取成骨细胞，通过形态观察、HE 染色、碱性磷酸酶染色及矿化结节染色来鉴定成骨细胞[8]。

1.2.2 实验分组及热处理