GC-MS法检测盐酸雷尼替丁制剂中的20种邻苯二甲酸酯类塑化剂

海丽萍，王雪芹（1.河南省直属机关第一门诊部，郑州450003；2.河南省食品药品检验所，郑州450003）

在药品制剂中添加塑化剂可增强囊壳的韧性和片剂薄膜衣的包衣稳定，使制剂不易破损且效果较好。但近年来关于增塑剂邻苯二甲酸酯类（Phthalates，简称PAEs）对环境造成危害的报道[1-3]屡见不鲜。邻苯二甲酸酯类被归类为内分泌破坏性物质，并表现出生物累积性，可改变人体荷尔蒙中的雌激素水平，从而导致严重的健康问题，例如癌症、生殖及发育损害等。增塑剂的检测及污染研究已在国内引起人们的重视，但有关药品中增塑剂的研究文献报道较少。国家食品药品监督管理局（以下简称药监局）、中国食品药品检定研究院于2011年6月召开了“药品中邻苯二甲酸酯类物质应急检验工作会议”，要求对国家评价性抽验重点品种进行塑化剂检测。为了解药品中邻苯二甲酸酯类增塑剂的情况，笔者参照有关要求[4-6]，采用全扫描（SCAN）和选择离子监测（SIR）模式，结合有机溶剂提取等前处理方法，建立了测定雷尼替丁制剂中邻苯二甲酸酯类的气相色谱-质谱（GC-MS）方法，以期能更准确、更全面地了解药品中邻苯二甲酸酯类的污染情况，及时为药监局制订监督方案提供数据支持。

1 材料

1.1 仪器

Finnigan TRAGE-DSQ GC/MS气质联用仪（美国热电公司）。

1.2 药品与试剂

17成分混标（德国Dr.Ehrenstorfer公司提供，批号：01025HE，每种成分均为1 000 μg/ml，以正己烷为稀释溶剂）；塑化剂检测专用3个单标对照品即邻苯二甲酸二苯酯、邻苯二甲酸二异壬酯和邻苯二甲酸二异癸酯（中国食品药品检定研究院，纯度：以100%计）；甲醇为色谱纯。

285批样品，包括281批雷尼替丁胶囊和4批雷尼替丁片（规格均为：每粒/片150 mg，批号略，来自国内106个不同厂家；4批片剂中有1批来自河南省食品药品检验所）均为各省药监局在全国医药市场上按照正常抽样程序抽取的流通样品。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为DB-5MS毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；载气为氦气，流速为1.0 ml/min；自动进样，分流比为10∶1；进样量为1 μl；进样口温度为250℃；柱温为程序升温：60℃保持1 min，以20℃/min的速率升至220℃保持1 min，以5℃/min的速率升至300℃保持7 min。

EI（电子轰击）电离方式；电子轰击能为70 eV；传输线温度为280℃；离子源温度为230℃；溶剂延时3.00 min。

试验中各组分的定性分析采用SCAN模式，扫描质量范围为50～650 amu；定量测定采用SIR模式。

2.2 溶液制备

2.2.1 标准溶液的制备。用甲醇将3个单标对照品分别溶解并稀释制成1 mg/ml的溶液，再分别吸取17成分混标和3个单标溶液用甲醇稀释成各含40 μg/ml的混标溶液，依次稀释成质量浓度均为30、20、10、4、2 μg/ml的混合标准工作液。

2.2.2 样品的制备。取待测样品研细（囊壳剪碎），取细粉（碎片）1 g置于10 ml离心管中，准确加入甲醇5 ml，超声30 min，静置后取上清液（必要时滤过）作为供试品溶液，整个试验过程不能接触塑料设备。

2.3 检测方法

2.3.1 提取溶剂的选择。分别试验了正己烷和甲醇等常用提取溶剂，结果均对邻苯二甲酸酯有良好的提取效果。考虑到甲醇的挥发性毒性相对较小，且易得到色谱纯试剂，故选用甲醇作为提取溶剂。

2.3.2 标准色谱图。按质谱分析条件对20种邻苯二甲酸酯类的混合标准工作液（质量浓度40、4 μg/ml）进行分析，结果，20种邻苯二甲酸酯类化合物的总离子流SCAN色谱图见图1，SIR色谱图见图2。

图1 20种邻苯二甲酸酯类总离子流-SCAN色谱图（40 μg/ml）Fig1 TIC-SCAN chromatograms of 20 kinds of phthalates（40 μg/ml）

图2 20种邻苯二甲酸酯类总离子流-SIR色谱图（4 μg/ml）Fig 2TIC-SIR chromatograms of 20 kinds of phthalates（4 μg/ml）

由图1、图2可见，在此条件下20种邻苯二甲酸酯均能良好地分离。20种化合物的特征离子见表1。

2.3.3 线性范围与检测限。利用外标法将峰面积与18种（除邻苯二甲酸二异壬酯、邻苯二甲酸二异癸酯外）邻苯二甲酸酯类浓度之间的关系进行定量。结果，18种邻苯二甲酸酯类检测质量浓度线性范围为2～40 μg/ml，相关系数均大于0.99。

以信噪比为3确定方法检测限，得18种邻苯二甲酸酯类的检测限均大于2 μg/g（g指样品质量）。

2.3.4 精密度试验。将质量浓度为4 μg/ml的20种邻苯二甲酸酯类混合标准工作液重复进样6次，结果，峰面积的RSD均＜10%。

表1 20种邻苯二甲酸酯的特征检测离子Tab1 Mass ion of 20 kinds of phthalates

2.3.5 准确度试验。取本品1 g，加入20种邻苯二甲酸酯类的混合标准工作液适量，照“2.2.2”项下方法处理样品，进样检测，计算回收率。结果，18种成分的回收率在79%～99%间。

2.4 盐酸雷尼替丁制剂中邻苯二甲酸酯类化合物的检测结果

分别对不同厂家的285批样品（片剂4批、胶囊剂281批），经“2.2.2”项下方法处理后，采用SCAN方式对邻苯二甲酸酯类化合物的种类进行定性，用SIR方式对检出阳性成分进行定量研究。依据待测样品色谱峰的保留时间和特牲离子并结合计算机NIST谱库检索进行定性；分别用表1中的特征离子作为20种成分的监测离子，以色谱峰面积外标法进行定量。检测结果见表2。

表2 样品检测结果Tab2 Results of the determination of samples

检测结果显示，285批样品中，有1批检出邻苯二甲酸二乙酯，此批样品为薄膜衣片（此为验证建立的方法是否可行而制备的阳性对照样品），原因是在包衣过程中为使包衣效果更好而使用了该物质；其他制剂中均未检出20种塑化剂成分。

3 讨论

（1）本文建立的方法适用于口服固体制剂中塑化剂的监测，及时为国家药监局对口服固体制剂中塑化剂的监管工作提供了强有力的技术和数据支持。检测限和检出浓度均能满足要求。选用既有挥发性、毒性较小、又容易得到色谱纯级别的甲醇作为提取溶剂，利于监测工作的进行。

（2）塑化剂成分对液相色谱和液质联用仪器的污染和残留比较大；而选用气相质谱联用法可以同时测定多种塑化剂成分，同时对仪器和色谱柱的污染和残留较小，且样品处理简单，方法快速、灵敏、简便易行。由于塑化剂的各成分存留于塑料制品中几率较大，因此整个试验过程中禁止使用塑料容器。

（3）本色谱条件下（见图1、图2）保留时间在20～25 min的一簇色谱峰为邻苯二甲酸二异壬酯、邻苯二甲酸二异癸酯等系列同系物的混合峰，若样品中明显检出色谱峰，应再进一步单标定位检测；定量时暂不考虑表1中的19、20号峰。

[1]赵文红.酞酸酯类增塑剂毒理研究进展[J].环境与职业医学，2003，20（2）：135.

[2]王小逸，林光桃，容慧明，等.北京地区家庭中邻苯二甲酸酯类环境污染物的调查[J].环境与健康杂志，2007，24（10）：820.

[3]郑和辉，赵立文，刘玉敏，等.饮用水中邻苯二甲酸酯的气相色谱-质谱测定法[J].环境与健康杂志，2005，22（5）：377.

[4]蔡智鸣，史馨，张前龙，等.GC-MS测定人血清中酞酸酯类环境污染物[J].理化检验：化学分册，2006，42（2）：115.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典：二部[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：附录31、78.

[6]中国食品药品检定研究院.2011年国家评价性抽样品种塑化剂检测任务工作手册[S].2011.