MTA1基因的表达水平与胃癌淋巴结转移相关性的临床研究

郑君华， 王永兵， 顾天来， 罗芸葆

(上海市浦东新区人民医院普外科， 上海 浦东新区 201200)

胃癌在我国是最常见的恶性肿瘤之一，死亡率居恶性肿瘤首位[1]。淋巴结转移是胃癌最主要的转移途径，可占70%左右[2]。在胃癌的淋巴结转移中，许多肿瘤转移促进基因可能参与这一过程。其中MTA1基因为其中之一。TohY等[3]研究发现，MTA1过表达的胃癌患者更多出现浆膜浸润、淋巴结转移及血管受累。为进一步探讨其表达水平与胃癌淋巴结转移关系:

1 资料和方法

1.1 病例和标本来源:全部病例来源于本院2008年至2011年的住院胃癌手术患者。标本来自以上病例。每个病例送检的病理组织均包括正常胃黏膜、胃癌原发灶及胃癌淋巴结转移灶。所有标本均经病理诊断确认。

1.2 实验仪器和材料:Trizol购自美国Invitrogen公司、RT-PCR扩增试剂盒购于 Takara公司;PTC-200 PCR循环仪由美国MJ公司提供。LightCycler(480高通量实时荧光定量PCR系统购自美国Roche Diagnostics公司。凝胶电泳成像系统为美国Bio-Rad公司产品。人MTA1基因扩增引物由Takara公司设计完成。引物上游序列:5'-ACGACATGAACGGCTGTTACTCAC-3';引物下游序列:5'AGCGGCTTGCGTAC-3'。产物长度:442bp基因扩增引物。

1.3 方法

1.3.1 样本总RNA提取和反转成cDNA:Trizol法提取细胞总RNA，紫外分光光度仪检测RNA的质量和浓度。取总RNA 3μg进行逆转录反应，步骤按操作说明书进行，逆转录的cDNA置-20℃保存。

1.3.2 实时荧光定量 PCR扩增:取cDNA 2μL，加入10×buffer 2.5μL、dNTP 0.5μL、模板1.0μL、上游引物(10μM)1.0μL、下游引物(10μM)1.0μL、Taq 酶 0.5μL、ddH2O 17.0μL，反应总体积合计 25μL。混匀后按下列条件进行PCR反应:94℃ 5min→(94℃40sec→58℃40sec→72℃40sec)×30→72℃ 7min，扩增产物为420bp。

1.3.3 结果判断:取扩增产物10μL，上样于1.6%琼脂糖凝胶，电泳后置0.5 mg/mL溴乙锭染色25 min，用凝胶成像系统分析结果。

1.4 统计学处理:本研究采用SPSS16.0软件分析，定量资料中符合正态分布和方差齐者，用t检验。……