PTEN survivin基因在肝癌组织中的蛋白表达及相关研究

王立成， 于淑玲， 于淑莉

(1.河北省承德市中心医院普外科， 河北 承德 067000

2.河北省承德市第三医院，河北 承德 067000

3.河北省承德市妇幼保健院， 河北 承德 067000)

本研究应用免疫组化的方法探讨凋亡相关的两个基因PTEN和survivin在HCC的表达情况与临床病理学特征的关系及其相关性，以期探讨评估HCC肝切除术后预后的相关指标，为肝癌的发生发展及治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 标本:肝癌标本43例均为承德市中心医院2004年6月至2010年1月间手术切除标本，术前均未放化疗，术后病理诊断为肝癌，切除肝癌标本常规制成蜡块保存。癌旁组织取自癌灶旁2-3cm，经病理证实无癌细胞。临床病理资料完整。男33例，女10例，年龄30-71岁，平均51±9.29岁;小肝癌(直径≤5cm)16例，大肝癌(直径＞5cm)27例;TNM临床分期:Ⅰ期5例，Ⅱ期20例，Ⅲ期10例，Ⅳ期8例:组织学分级(Edmondson分级):Ⅰ级4例，Ⅱ级16例，Ⅲ级18例，Ⅳ级5例;术前血清AFP＞400g/L19例、侵袭转移倾向高危组15例(15/43)，侵袭转移倾向低危组28例(28/43)。血清AFP＞400μg/L 19例，＜400μg/L 24例。符合下列条件之一为侵袭转移倾向高危组:肝门淋巴结癌转移;门静脉有癌栓;同一肝叶内主癌灶周围肿瘤数目＞2个或有多个小卫星结节或伴有包膜侵袭破坏，无上述特征者为侵袭转移倾向低危组。

1.2 试剂:小鼠抗人PTEN单克隆抗体、S-P法免疫组化检测试剂 、DAB染色试剂盒(均购自北京中杉金桥生物技术有限公司)，鼠抗人survivin单克隆抗体(福州迈新生物技术有限公司)。

1.3 实验方法:蜡块均做4μm厚连续切片。免疫组化采用链霉菌-生物素(S-P)法，DAB显色、苏木素复染、脱水、二甲苯透明、中性树胶封固。以0.01MPBS液(pH=7.5)替代一抗作为每次染色的阴性对照，已知表达的肝癌组织作为阳性对照。……