稳定表达鸡ST3GALⅠ基因BHK-21细胞株的建立

陈 欢，李明义，高 轩＊

（1.河北农业大学动物科技学院，河北保定071000；2.山东信得科技股份有限公司，山东青岛266101）

唾液酸（sialic acid）广泛存在于各种生物组织中，是构成细胞表面糖缀合物的组成成分，通常处于糖蛋白、糖脂和其他多糖的末端以糖苷的形式存在，携带负电荷，因而对于细胞与细胞之间的识别及细胞和细胞外基质的相互作用有重要影响。流感病毒通过其表面的血凝素（HA）与宿主细胞表面唾液酸寡糖受体结合侵染宿主细胞。禽流感病毒倾向识别α-2，3连接型受体（NeuAcα-2，3-Gal），而人流感病毒倾向识别α-2，6连接型受体（NeuAcα-2，6-Gal）。β-半乳糖苷α-2，N-唾液酸转移酶（β-galactosideα-2，N-sialyltransferase，STNGal）属于Ⅱ类膜蛋白，催化生成不同连接形式唾液酸的过程，这一过程产生唾液酸胞苷单磷酸酯（CMP-NeuAc），与各种寡糖结合从而组成多种糖蛋白、糖脂及多糖［1］，使唾液酸以不同连接形式存在于酸化的糖配体末端形成受体组分，在细胞与细胞的识别、细胞分化及受体-配体联接系统中扮演重要角色［2］。研究表明，禽流感病毒虽具备在MDCK、BHK-21等哺乳动物细胞的复制增殖能力，但由于受体丰度较低，造成病毒滴度低，形成蚀斑能力弱，给深入研究乃至疫苗和抗病毒药物研制造成极大困难。本研究构建了鸡ST3GalⅠ 基因的真核表达载体pcDNA3.1-EGFP-ST3GaⅠ，体外转染BHK-21细胞株，建立稳定表达ST3GaⅠ基因的BHK-21细胞系，通过稳定表达ST3GALⅠ基因，增强ST3GalⅠ催化唾液酸与乳糖以α-2，3形式连接的效力，从而提高BHK-21细胞表面α-2，3连接型受体丰度，为大规模细胞培养生产疫苗提供备选细胞系。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 细胞、菌株和质粒 pcDNA3.1-EGFP载体购自长沙赢润生物技术有限公司；……