新城疫病毒Class I强毒株磷蛋白在细胞中的表达与定位

程靖华，孙英杰， 陈鸿军，仇旭升，宋翠萍 ，于圣青，吴艳涛，丁铲

（1.扬州大学兽医学院，扬州 225400；2.中国农业科学院上海兽医研究所，上海 200241）

新城疫病毒（Newcastle disease virus, NDV）是副黏病毒科、禽腮腺炎病毒属唯一成员，可以感染200余种禽类、鸟类和其他多种动物，一直是危害世界养禽业的最主要病患之一。根据系统发育进化树分析可将不同基因组长度的NDV分为两个群，即ClassⅠ（15198 nt）和ClassⅡ（15192 nt或15186 nt）[1,2]。目前已报道的大多数强毒分离株均属于ClassⅡ，而ClassⅠ中大部分是低致病力的弱毒株（loNDV）或无毒株，这些loNDV普遍存在于各种家禽和野鸟体内，因为NDV仅有一种血清型，因此，这些毒株与强毒株在血清学上根本无法区分[3]。也正是由于ClassⅠ毒株宿主具有高度迁徙的特点，极易导致NDV由野鸟或水禽向家禽中转移，进而演化为临床致病性强毒[4]。Yu等[5]研究发现一株从野生水禽分离到的非致病性NDV毒株，但当该病毒在SPF鸡体内经过9次气囊接种（9a）和5次脑内接种（5b）传代后，演变为速发型NDV，从而证实NDV弱毒株可以在鸡体内经传代后发生毒力变异。

NDV为单链负股RNA病毒，编码6种结构蛋白，即核衣壳蛋白（Nucleoprotein, NP）、磷蛋白（Phosphoprotein, P）、基质蛋白（Matrix proein, M）、融合蛋白（Fusion protein, F）、血凝素-神经氨酸酶（Hemagglutinin-neuraminidase protein, HN）和大分子蛋白（Large protein, L）[1]。其中，P蛋白可被高度磷酸化，P蛋白与L蛋白共同构成完整的RNA依赖的RNA聚合酶，对病毒RNA的转录、复制及修饰至关重要。本研究通过对P蛋白的表达、磷酸化水平检测和亚细胞动态定位情况分析，旨在为深入研究P蛋白磷酸化程度与功能关系、P蛋白参与病毒繁殖的具体机制奠定基础。

1 材料与方法

1.1 病毒 NDV Class I强毒分离株9a5b由中国农业科学院上海兽医研究所禽传染病实验室保存，其亲本毒株（Goose/Alaska/415/91）分离自一只已迁徙到阿拉斯加的野生水禽。……