大鼠心室肌细胞单通道钙电流的记录及其电生理学特性分析

刘书源，刘雅茹，高青华，赵美眯，赵金生，孙雪菲，郝丽英

（中国医科大学1.药学院药物毒理教研室；2.生物制药研究室，沈阳 110001）

L-型钙通道普遍存在于机体的各种组织和细胞中，尤其是骨骼肌和心肌［1，2］，L-型钙通道在生理功能的调节方面起到了重要作用，钙离子通过L-型钙通道进入细胞后［3］，可引起肌细胞兴奋和收缩［4］，调控腺体分泌激素和调节基因的表达［5］。因此对L-型钙通道的研究一直是多个学科领域的研究热点。膜片钳技术是研究离子通道的主要技术，共有4种基本记录模式。由于L-型钙通道电导小，大多实验室都采用全细胞记录模式研究整个细胞中L-型钙通道的作用，但是单通道记录模式可以使我们了解到L-型钙通道的门控机制、通道性质与结构关系、细胞内通道信号的转导过程等，其中细胞贴附式记录模式可用于检测离子通道的特性，内膜外记录模式可以便于更换细胞内液，适于研究离子通道的细胞内成分的效应［6］。所以确立稳定的心室肌细胞的膜片钳单通道的记录模式尤为重要。本研究在以往研究的基础上，对记录单通道钙电流的实验方法进行改进，记录到大鼠心室肌细胞膜上的单通道钙电流，并分析L-型钙通道的基本特性，为研究离子通道的细胞内成分效应奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物

Wistar大鼠（250～350 g），雌雄不限，由中国医科大学实验动物中心提供。

1.2 溶液与药品

无钙台氏液（mmol/L）：NaCl 135，KCl 5.4，MgCl21.0，NaH2PO40.33，Glucose 5，CaCl21.8，和 Hepes 10（pH 7.4）；保存液（KB 液）（mmol/L）：KOH 70，Glutamic acid 50，KCl 40，KH2PO420，Taurine 20，MgCl23，Glucose 10，EGTA 0.5，Hepes 10（pH 7.4）；电极内液 （mmol/L）：BaCl250，TEACl 70，EGTA 0.5，Bay K8644 0.03和 Hepes 10（pH 7.4）；IO 液（mmol/L）：Aspartic acid 130，KOH 100，KCl 30，MgCl20.5，EGTA 1，CaCl20.5，HEPES 10（pH 7.4）。NaCl，KCl，MgCl2，NaH2PO4，NaOH，KOH，KH2PO4，Glucose 和 Taurine均为国产市售分析纯试剂；……