适合转录组测序的葡萄叶片总RNA试剂盒提取法的改进

杨晓燕 张波， 黄方爱 颜欢 李月荣 郑秋生

从植物组织中提取RNA是进行植物分子生物学方面研究的必要前提［1］，近年来发展的高通量测序技术，如转录组短枪测序法（Whole Transcriptome Shotgun Sequencing）、转录组测序技术（RNA-Seq）和高性能的生物信息分析技术对于RNA的质量要求较高，这对RNA提取在完整性和纯度方面有了更高的要求。

植物含有大量的多糖、多酚、代谢产物、色素等成分，增加了高质量RNA的提取难度；由于种属和取材部位的不同亦会造成提取策略个体化及复杂化，适合植物RNA提取的方法也不尽相同［2-5］。葡萄组织中就有多种次生代谢产物，较难提取到高质量的RNA［6］，尽管国内外的研究者已经开发出从葡萄组织中提取 RNA 的方法，如 SDS 法［7］、CTAB 法［8，9］、以及二者结合法等方法［10］。近年来，商业化的RNA提取试剂盒在一些植物样品RNA提取中已被证明具有简单快捷，试验重复性较好的优点。但对于高质量尤其是满足测序要求的样本，其应用效果尚待评价。为了满足本课题对于葡萄叶片样本RNA提取效果较高的需求，本研究拟对比3种新疆地区常见植物RNA提取试剂盒在葡萄叶片RNA提取中的效果，并针对葡萄叶片材料特性对试剂盒操作流程优化，建立适合于RNA-Seq测序的葡萄叶片高质量RNA提取方案。

1 材料与方法

1.1 材料

供试材料为红地球葡萄（Vitis vinifera L.cv.Red Globe）1月龄叶片，取自于石河子大学药园。

1.2 方法

1.2.1 总RNA 的提取方法 首先通过变性剂裂解破碎组织，然后经过氯仿等有机溶剂变性蛋白并抽提RNA，最后将RNA经过沉淀、洗涤、干燥并溶解待用。1.2.2.1 试剂盒A：UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒（生工生物工程股份有限公司，上海）。……