阪崎肠杆菌胶体金试纸条的制备及初步应用

周鹤峰 邵敏 李长福 葛正龙

阪崎肠杆菌（Enterobacter sakazakii，ES）是一种周生鞭毛、革兰氏阴性无芽胞杆菌，为条件致病菌，新生儿特别是早产儿和免疫力低下的人作为易感染人群，易导致脑膜炎、菌血症和坏死性小肠结肠炎［1］。流行病学调查发现，阪崎肠杆菌主要通过婴儿配方奶粉传播导致感染，死亡率高达50％以上，FAO/WHO已经将其列为A类危险致病微生物［2］。近年来，阪崎肠杆菌感染事件国内外相继报道，已引起世界各国重视，其中较多的是婴儿配方奶粉污染［3］。

目前，阪崎肠杆菌的检测主要依赖传统细菌学分离培养方法、分子生物学等检测手段［4］，我国已于2005年颁布了ES分离与计数检验的行业标准，但上述方法都存在检测周期长、操作繁琐等不足，很难在实际快速检测中得到广泛推广和应用。免疫胶体金层析技术（GICA）具有简单、快速、准确、不需贵重仪器设备和专业技术人员操作等优点，近年来在多个领域得到了较广泛的应用，但将胶体金免疫层析试纸条用于阪崎肠杆菌的检测目前国内外未见报道。本研究利用课题组前期筛选出的杂交瘤细胞株制备了阪崎肠杆菌单克隆抗体，采用辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体，双抗夹心法制备胶体金试纸条，并进行初步检测试验，旨在为今后开发商品化的快速检测试纸条产品奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂 氯金酸（AuCl3·HCl·4H2O）、牛血清白蛋白（BSA）购自美国Sigma公司；柠檬酸三钠、Tween-20购自上海精析化工科技有限公司；硝酸纤维素（NC）膜购自美国Millipore公司；……