甜瓜乙烯受体基因Cm-ETR1 cDNA的克隆及表达特性分析

陈宇杰 陈明 乌兰巴特尔 郝金凤 高峰 哈斯阿古拉

乙烯作为一种重要的植物激素，在植物生长发育、成熟衰老等诸多生理过程中起着极为重要的作用［1］。乙烯受体是乙烯信号转导途径中的一个关键因子，研究表明乙烯受体的存在是乙烯应答顺利进行所必需的［2］。编码乙烯受体的基因属于多基因家族，在拟南芥乙烯受体基因家族中已发现5个成员ETR1、ERS1、ETR2、ERS2和EIN4［3］，根据其结构特征，将乙烯受体家族成员分成两个亚家族，亚家族Ⅰ包括ETR1和ERS1，亚家族Ⅱ包括ETR2、ERS2和EIN4。目前，人们已经从番茄［4］、梨［5］等多种果实中克隆到了乙烯受体基因ETR1。1999年，Sato-Nara等［6］从甜瓜品种FuyuA和Natsu4中克隆到Cm-ETR1cDNA序列，基因表达分析结果表明，Cm-ETR1在完全膨大期果实果皮有少量表达，在成熟早期和后期的果皮中的表达逐渐增强。但目前尚不了解该基因在甜瓜果实成熟及呼吸跃变过程中的确切功能。

本研究以典型的呼吸跃变型甜瓜品种河套蜜瓜为研究对象，从成熟果实中克隆Cm-ETR1cDNA全长序列，分析果实不同发育时期内源乙烯生成规律，并应用定量PCR技术分析该基因在甜瓜果实发育成熟过程中的表达特性，为阐明Cm-ETR1 基因在甜瓜果实成熟及呼吸跃变过程中的功能奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料

甜瓜品种河套蜜瓜（Cucumismelo L.cv Hetao）原种，由本实验室保存。选取大田种植的9个成熟果实，取中果皮组织于液氮速冻，用于基因克隆。从授粉后0d开始，每隔5d采摘果实，直至果实完全成熟变软，取中果皮组织于液氮速冻，用于基因表达分析。为保证数据的准确性和可靠性，每天上午9时采摘果实，重复3次。……