LY-294002对大鼠急性脊髓损伤后Bcl-2表达的影响

王岩峰 秦光华 杨明超 王 喆 (中国医科大学附属第一医院骨科，辽宁 沈阳 110001)

Bcl-2抑制细胞凋亡基因机制为:①抑制内质网Ca2+的释放;②Bcl-2阻止促凋亡基因信号传递或阻止诱导某些基因表达;③抑制自由基。潘磊等〔1〕对60只Wistar成年大鼠研究发现，实验组Bcl-2蛋白不仅在神经元中提高表达，更多在胶质细胞中表达，同时降低Bax的表达，BBB评分表明，神经细胞凋亡明显减少，大鼠神经功能恢复明显。国外有学者证实毫微粒MP疗法能减少副作用，增强急性脊髓损伤(SCI)功能恢复，其机制之一仍为提高 Bcl-2表达和抑制 Bax表达〔2〕，但是 LY-294002是否能够提高SCI大鼠脊髓损伤部位Bcl-2的表达尚不清楚。本实验参照Nystrom压迫方法制作大鼠脊髓压迫损伤模型，通过免疫组化和Western印迹方法检测不同时间点Bcl-2的表达情况，探讨PI3K/Akt信号通路在SCI的病理作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料 羊抗大鼠Bcl-2多克隆抗体(Santa-Cruz，CA);PI3K阻断剂(LY-294002)，兔抗羊IgG、S-P免疫组化染色试剂盒、DAB显色试剂盒(福州迈新)。

1.2 方法

1.2.1 大鼠SCI动物模型的建立及分组 取健康成熟SD大鼠104只，雌雄不限，体重220～250 g，由中国医科大学实验动物中心提供。随机分为:SCI组:脊髓损伤后分2 h，8 h，1 d，3 d，5 d，7 d共个6时间点，每个时间点8只;LY294002组:脊髓损伤前 0.5 h 尾静脉注射 LY-294002，分为 2 h，8 h，1 d，3 d，5 d，7 d共6个时间点，每个时间点8只，空白对照组8只，不做任何处理。模型制备:10%水合氯醛0.4 ml/100 g腹腔内注射，俯卧位固定，无菌原则下进行背正中切口，切除T8、T9椎板，暴露硬脊膜，整个过程保证硬脊膜的完整。按Nystrom法将35 g重物通过2.2 mm×5 mm弧形光滑金属垫片压迫该段脊髓后正中部5 min，分层缝合，碘伏消毒。损伤后，每天人工排尿(便)两次，局部消毒一次。……