缺氧诱导因子-1α及血管内皮生长因子在Ⅱ型胶原诱导性关节炎模型中的致病作用

刘 菁 梁 爽 黄大林 王 雯 李莎莎 陈森洲 (桂林医学院，广西 桂林 541004)

类风湿关节炎(RA)不仅累及关节，而且具有严重的并发症及多种关节外表现，其病因和发病机制迄今尚未明确。近年来研究发现，低氧诱导因子-1α(HIF-1α)在调节缺氧组织血管新生、细胞增殖存活、能量代谢、铁转运等方面具有重要作用。血管内皮生长因子(VEGF)可直接促进滑膜血管翳形成、加重滑膜炎症及骨与关节软骨的破坏。Tang等〔1〕通过对肿瘤内皮细胞敲除HIF-1α基因，证实了HIF-1α调控血管发生的功能。HIF-1α通过上调VEGF表达，促进血管生成，可能是其参与RA发病最重要机制之一。本文探讨HIF-1α在RA发病过程中的作用及其与VEGF之间的关系。

1 材料与方法

1.1 主要仪器 病理组织切片机(LEICA RM，2025，德国);制冰机(SLM-F124，日本);多功能高速冷冻离心机(Eppendorf，5804R，德国);生物组织自动脱水机(TS-12F，湖北)及病理组织包埋机和包埋冷冻台(BMJ-III，常州)等。

1.2 主要试剂 牛Ⅱ型胶原，不完全弗氏佐剂(Sigma，F5506-10 ml)，TRIZOL(美国 Invitrogen 公司，批号 1382739)，RT-PCR试剂盒(大连宝生物工程有限公司，DRR014A)，HIF-1α一抗(Abcam，批号653496)，二抗、DAB显色剂(福州迈新生物工程有限公司，批号:100301408A、1003150031)，羊血清工作液(北京中衫金桥生物工程有限公司，批号:90519050)。

1.3 实验动物及分组 选用体重150～180 g的50只SD健康大鼠(雌雄各半)，动物级别:SPF，由本院实验动物中心提供，动物许可证号:SCXK桂2007-0001，购入本实验室动物房分笼喂养，每笼5只。每日给予标准饲料，清洁自来水置笼侧自由饮用，适应性饲养1 w后进行实验。

1.4 模型制作〔2〕Ⅱ型胶原用0.1 mol/L冰醋酸溶解后，配成2 g/L溶液，置4℃冰箱过夜。第2天将搅拌好的Ⅱ型胶原醋酸溶液按1∶1在冰浴中滴加至 IFA，充分乳化后，终浓度为1 g/L。……