老年大鼠海马细胞凋亡和神经元信号转导通路的变化与学习记忆的关系

王 暖 耿德勤 黄红莉 周 昊 杨秀华 (徐州市第一人民医院神经内科，江苏 徐州 22002)

衰老与海马细胞凋亡以及神经元存活信号转导通路的变化有着密切联系，但众说不一。磷脂酰肌醇3-激酶 (PI3K)-AKt-Caspase-9信号转导途径是细胞内重要的信号转导通路，在细胞的凋亡、存活、增殖以及细胞骨架的变化等活动中发挥重要的生物学功能，其中尤为重要的是它对细胞凋亡、存活的调节作用〔1，2〕。而老年大鼠是否存在 PI3K-AKt-Caspase-9信号转导通路的障碍，尚不十分清楚。本研究探讨老年大鼠海马组织细胞凋亡、PI3K-AKt-Caspase-9信号转导通路与学习记忆的关系。

1 材料与方法

1.1 实验动物及主要试剂和仪器 健康SD大鼠:青年鼠(8月龄，200～250 g)，老年鼠(24月龄，450～500 g)各8只，雌雄各半，由徐州医学院实验动物中心提供。Caspase-9 P35抗体、PI3K P85抗体、AKt抗体、p-AKt(ser473)抗体及二抗均购自美国Santa Cruz公司，p(Tyr)-PI3K P85抗体购自美国cell signaling公司，Y型迷宫、免疫组化试剂盒和TUNEL试剂盒均购自国内。

1.2 学习记忆能力测试 两组大鼠分别进行Y型迷宫实验。连续10次电击中有9次正确为达到学会标准，记录动物达到标准所需电击的次数，以此作为学习快慢程度的指标，24 h后重复以上实验过程，观察大鼠的记忆能力。

1.3 TUNEL染色和免疫组化染色 Y迷宫测试24 h后留取8只(每组4只)大鼠麻醉，仰卧于固定台上，暴露心脏，经左心室插入导管至升主动脉，剪开右心耳，先快速灌注生理盐水100～150 ml，再灌注4℃4%多聚甲醛300 ml，然后断头取脑，在视交叉后1 mm及4 mm处以冠状切面切开鼠脑留取中间切块，入4%多聚甲醛中后固定24～48 h，然后按以下程序进行:固定后组……