左归丸含药血清通过p38 MAPK信号通路诱导MC3T3-E1成骨细胞的分化

刘立萍 任艳玲 李 然 王智民 赵金茹 蒿长英 宋 囡

(辽宁中医药大学基础医学院，辽宁 沈阳 110847)

绝经后骨质疏松(PMOP)是以骨量减少、骨组织微观结构改变，骨脆性增强，骨折发生率高为特征的临床常见病症，对于PMOP的防治日益受到人们的关注，现代研究表明中医药在PMOP的药物治疗方面取得了不少成果〔1〕。左归丸具有滋阴补肾、填精益髓作用，本课题组前期研究结果表明左归丸对去卵巢所致PMOP大鼠有一定防治作用〔2〕。为了进一步探讨左归丸治疗PMOP的作用机制，本实验探讨p38 MAPK信号通路对左归丸含药血清调控MC3T3-E1成骨细胞分化的影响。

1 材料与方法

1.1 实验动物及细胞 SPF级SD雌性大鼠60只，(200±20)g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供，许可证号:SCXK(沪)2008-0016。MC3T3-E1 Subclone 14，由中国科学院上海生命科学研究院提供。MC3T3-E1成骨细胞用含10%FBS的α-MEM培养液培养，每周换2次培养液，37℃、5%CO2培养箱内孵育。

1.2 药物与试剂 左归丸(上海雷允上封浜制药有限公司，国药准字Z31020371);倍美力结合雌激素片(爱尔兰惠氏药厂，国药准字 J20050120)，SB203580、PNPP、茜素红(Sigma)，抗ALP抗体(博士德)，抗GAPDH抗体(北京中杉)。

1.3 主要仪器 iMark型酶标仪(Bio-Rad);Trans-Blot SD半干转印系统(Bio-Rad);EC3凝胶成像仪(UVP)。

1.4 方法

1.4.1 含药血清的制备 大鼠按体重随机分为3组，空白对照组、左归丸组、倍美力组，20只/组。根据人与大鼠等剂量换算公式折算大鼠左归丸的等临床剂量为1.6 g/kg体重，倍美力为56.25 μg/kg。药物灌服10 ml/kg，空白对照组灌服蒸馏水，2次/d，于第8天给药2 h后，麻醉，腹主动脉取血，室温静置2 h，离心20 min，取血清，56 ℃灭活30 min，过滤除菌，－80 ℃保存。

1.4.2 细胞实验分组 p38 MAPK特异阻滞剂SB203580(10 μmol/L)用DMSO(浓度＜0.1%)溶解。实验分为空白对照组(Control)、SB203580组(SB)、左归丸组(ZG)、左归丸加SB203580组(ZG+SB)、倍美力组(BML)、倍美力加SB203580组(BML+SB)。……