褪黑素对阿尔茨海默病样细胞总tau蛋白表达的影响

吴敏霞 谢捷明 周琳瑛 (福建医科大学基础医学院病理学系电镜室，福建 福州 350004)

正常生理条件下，大脑中tau蛋白存在于神经元的轴突中，可促进微管蛋白聚集成微管并增强其稳定性、维持细胞的生长发育，且在神经系统的形成和轴突的通讯传导中起着至关重要的作用〔1〕。褪黑素(MLT)为体内松果体分泌的一种神经内分泌激素，化学结构为 N-乙酰-5-甲氧基色胺，现可人工合成。MLT具有某些重要的神经精神作用，如抗衰老、催眠、镇痛、抗癫痫、脑细胞损伤保护等作用。在AD患者，tau蛋白被异常过度磷酸化。课题组前期的研究也证明OA作用于NG108-15细胞导致细胞Ser-396位点磷酸化tau蛋白表达增高，与AD病人脑组织中的病理特征一致，可作为研究AD的细胞模型〔2〕。在此基础上，本实验用细胞免疫化学及细胞免疫印迹技术观察MLT对此AD样细胞总tau蛋白水平的影响，进而明确褪黑素对AD样细胞的拮抗作用，对其机制进行探讨。

1 材料与方法

1.1 材料 冈田酸(OA)为Sigma公司产品，用DMSO配成20 μmol/L的母液，分装备用。鼠抗tau蛋白单克隆抗体(Tau-5)，Neomarkers公司产品。Marker，Fermentas公司产品。大鼠神经母细胞和小鼠胶质细胞瘤细胞的杂交细胞系NG108-15细胞。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 NG108-15细胞用含15%胎牛血清的1640培养液，置于5%CO2、37℃培养箱中培养，用0.25%胰蛋白酶消化单层培养细胞，待细胞间隙变得较明显，细胞突起有所回收时终止消化，1640培养液吹打成单个细胞悬液，3～4 d传代一次，取对数生长期的细胞用于实验。

1.2.2 免疫细胞化学染色 利用总tau蛋白的抗体(Tau-5)，采用免疫细胞化学技术(ABC方法)显示总tau蛋白在细胞内的表达。……