ASPP1蛋白抗体制备及ASPP1在结肠癌组织中的表达

关晓辉 李晓莹 韩 笑 安丽萍 (北华大学附属医院，吉林 吉林 3200)

P53凋亡刺激蛋白(apoptosis stimulating protein of P53，ASPP)家族是新近发现的与P53有关的肿瘤抑制基因家族。研究此蛋白如何促进肿瘤细胞凋亡已成为当今热点话题。现己发现了该基因家族的3个成员:ASPP1、ASPP2和iASPP〔1〕。对ASPP的调控机制需要进一步探讨。通过抑制iASPP或激活ASPP来提高P53诱导细胞凋亡的功能。本研究根据生物信息学软件分析人ASPP1蛋白的二级结构、亲水性、疏水性和抗原性等理化性质，经同源性检索，综合考虑抗体设计的其他因素，设计一段多肽，制备多克隆抗体。同时采用免疫组织化学方法(SP法)检测ASPP1在结肠癌组织及正常组织中的表达情况，分析其在分化程度、浸润深度、淋巴结转移及预后的关系。为结肠癌的预后评估及指导综合治疗等提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 ASPP1抗原与实验动物 ASPP1抗原由本实验室提供，新西兰大白兔购自吉林省生物制品所。

1.1.2 资料选择 选取北华大学附属医院2005年1月至2010年12月住院手术治疗的结肠癌病人30例。其中男性16例，女性14例;平均年龄57.5岁(40～75岁)。正常结肠黏膜15例，标本来自北华大学附属医院病理科保存的蜡块。

1.1.3 试剂盒 S-P免疫组织化学染色试剂盒为美国Zymed公司产品，购自北京中山生物技术有限公司。Western印迹试剂盒，购自北京西美杰生物技术有限公司。

1.1.4 主要试剂 完全弗氏佐剂(CFA)和不完全弗氏佐剂(IFA)购自北京鼎国生物公司;人ASPP1蛋白和HRP标记羊抗兔IgG抗体购自Santa Cruz公司;ECL化学发光试剂盒购自Amersham公司。

1.2 研究方法

1.2.1 生物信息学分析 登录进入http://www.ncbi.nlm.nih.gov，采用Blastn和Blastx程序，进行同源性检索和保守性分析。……