Gadd45a在人脑胶质瘤细胞中的表达及其与细胞凋亡及增殖的关系

冀秀英 王艳梅 白 洋 梁丽梅 (吉林省精神神经病医院，吉林 四平 6000)

脑胶质瘤是由于大脑和脊髓胶质细胞癌变所产生的、最常见的原发性颅脑肿瘤。如同其他肿瘤(疾病)一样，胶质瘤也是由于先天的遗传高危因素和环境的致癌因素相互作用所导致的。Gadd45a细胞受到辐射等外界因素刺激DNA受到损伤后而表达的基因，Gadd45a基因高表达后可以通过阻滞细胞周期在G2-M期、修复DNA、促进细胞凋亡等保留大部分细胞的存活，而减少细胞癌变的可能。目前研究表明，Gadd45a基因异常表达与乳腺癌、胰腺癌、肺癌及前列腺癌密切相关〔1～5〕。本文探讨Gadd45a在人脑胶质瘤细胞中的表达及其与细胞凋亡及增殖的关系。

1 材料与方法

1.1 细胞、试剂及仪器 胶质瘤细胞系U251细胞购自上海科兴生物科技有限公司;正常脑组织来自我院神经外科手术切除组织;胎牛血清、annexinⅤ、PI、MTT试剂购自 Hyclone公司;M-MLV逆转录酶购自Promega公司;流式细胞仪购自美国BD公司。

1.2 方法

1.2.1 脑组织制备单细胞悬液的方法 将大脑组织置于事先消毒好的200目细胞筛(下接容器)，用玻璃棒轻轻研磨脑组织，使其变成单个细胞，待研碎后用生理盐水或培养液冲洗，细胞筛下容器内所盛溶液为单细胞悬液。用吸管吹打均匀后离心，1 000 r/min，5 min，倾出上清，如此冲洗1～2次后加生理盐水或培养液，制成单个脑细胞悬液，用于实验。

1.2.2 RT-PCR方法检测Gadd45a mRNA在细胞中的表达根据RT-PCR试剂盒说明书，提取正常脑组织神经细胞和U251细胞中的总RNA进行PCR反应。选择GAPDH作为内参照。Gadd45a上游引物:5'TTACATTGGCAAGTT3'，下游引物:5'C GCGCCGAATTCAT3'，342 bp;GAPDH 上游引物:5'GGATTCGCCATTACT3'，下游引物:5'AGGATTAGCTT3'，520 bp。……