吉林省常见的5种委陵菜trnL-F序列比对

王伯川，金 刚，刘春明，凌云辉，石 岩，张 本，张绍轩* (.吉林大学再生医学科学研究所，吉林 长春 00;.吉林省肿瘤医院，吉林 长春 00;.吉林大学中日联谊医院，吉林 长春 00;.吉林省中医药研究院，吉林长春 00)

委陵菜(Potentilla chinesis)为蔷薇科委陵菜属植物，具有清热解毒、凉血止痢之功能［1］。由于疗效确切，在《中国药典》历版中均被收载［2］。该属植物较多，仅吉林省境内就有10种之多。由于它们的亲缘关系接近，在同一生境内或不同生境内生长的各个物种间从外观上很难区别，加之所含化学成分接近，因而，用传统的外观鉴别、显微鉴别、薄层色谱鉴别很难达到满意效果［3］，导致误采、误用，影响疗效。为此，本研究采用trnL-F序列分析，对吉林省地产委陵菜属植物进行鉴别，以弥补上述方法的不足。

1 材料与方法

1.1 样品

委陵菜伏委陵菜，小叉叶委陵菜，霉叶委陵菜，蔓委陵菜为硅胶快速干燥的叶片。分别集于长吉高速公路和长春南湖公园处。均由长春中医药大学邓明鲁教授鉴定(见表1)。

表1 样品的采集地点和时间

1.2 DNA提取

称取0.3 g各样品叶片，置于培养皿中，加水少许，浸泡至充分展开，剪去病斑，用棉球擦拭叶片，去除杂质，再用70%乙醇擦拭叶片表面，然后用超纯水清洗3次，置于超净台上干燥;在液氮中研磨成细粉，然后按说明用北京鼎国植物基因组DNA提取试剂盒提取其总 DNA，溶于适量的超纯水中。取5 μL用1%琼脂糖凝胶电泳，检查DNA质量和数量。

1.3 引物设计

选择trnL通用引物［4］，由宝生物(中国 大连)合成，其序列如下:

PCR引物:

trnLF-cF:5'-TCC ACT GAA CCT TAT CAT TTA G-3'

trnLK-fR:5'-CCA TGC TTA AAC TCA GCG GGT-3'

测序用……