激肽释放酶14在卵巢癌组织中的表达及临床意义

颜秋梅 李巧云 闻立红

激肽释放酶14在卵巢癌组织中的表达及临床意义

颜秋梅 李巧云 闻立红

目的探讨激肽释放酶14(kallikreinl4)在卵巢癌组织的表达及临床意义。方法应用SP和ELISA法检测不同卵巢患者KLK14蛋白的表达和KLK14血清学的浓度。结果卵巢癌组KLK14蛋白表达阳性率/血清学浓度明显高于卵巢良性上皮肿瘤组和正常卵巢组。KLKl4蛋白表达与卵巢癌患者的临床分期，组织学分级有关。结论KLKl4过表达与卵巢癌的发生、侵袭相关，提示其可能成为卵巢癌的标志物。

肿瘤标志物；卵巢上皮性恶性肿瘤；KLKl4；SP；ELISA

激肽释放酶14(human kallikrein14)KLK14是人类激肽释放酶家族的1个成员，分子生物学实验证实它在卵巢癌组织中高度表达与卵巢癌的预后相关，提示其可能成为卵巢癌的标志物[1]。卵巢癌患者就诊时已处于晚期阶段，至今缺乏有效的诊断、监测，寻找能用于卵巢癌早期诊断的肿瘤标志物十分必要。

本试验应用SP和ELISA法检测了卵巢上皮性癌、良性上皮肿瘤、正常卵巢中KLKl4的蛋白表达情况及不同卵巢组血清中KLK14 的浓度变化，分析KLKl4蛋白在不同卵巢组中的表达及其与卵巢癌的临床病理之间的关系，探讨KLK14在卵巢癌发生侵袭中的作用，为卵巢癌的早期诊断提供实验依据。

1 资料与方法

1.1研究对象 标本取自2004年至2011年我院卵巢肿瘤手术切除标本65例。良性上皮肿瘤24例(浆液性囊腺瘤15例、粘液性囊腺瘤9例)，上皮性卵巢癌41例(浆液性囊腺癌30例、粘液性囊腺癌11例)，上皮性卵巢癌为首发病例，年龄32～73岁，平均年龄50.5岁，3个月内未应用任何激素治疗及化放疗，同期取子宫切除术中正常卵巢10例，手术病理分期1988(FIGO)：Ⅰ期5例，Ⅱ期9例，Ⅲ期21例，Ⅳ期6例。高分化10例，中分化12例，低分化19 例。

1.2方法

1.2.1SP：PBS代替一抗为阴性对照，已知KLKl4蛋白阳性的乳腺癌石蜡切片为阳性对照。胞浆有棕色颗粒者为KLKl4阳性细胞，光镜下随机选取5个视野，每个视野计数100个细胞，计算阳性细胞数占总细胞数的百分比，取5个视野的算术平均值。①根据显色细胞的比例计分：阳性细胞为0%计0分，阳性细胞<10%计1分，阳性细胞10%～50%计2分，阳性细胞51%～80%计3分；阳性细胞80%计4分。②根据细胞染色强度计分：0分癌细胞无着色，1分为浅黄色，2分为棕黄色，3分为黄褐色。积分=染色强度×阳性细胞数，积分范围0～12分，>4分为阳性表达。

1.2.2ELASA：血清标本取自术前2 d空腹肘静脉全血3 ml，置于未加抗凝剂的试管中， KLKl4测定根据说明书向被包有特异性单抗的微孔中准确加入50 μl缓冲液再加50 μl标准品或标本，室温震荡孵育1 h，再加100 μl曲生物素标记的第二抗体溶液，室温震荡孵育1 h，洗涤后加入酶结合物，室温震荡孵育30 min后洗涤，加底物液室温孵育30 min,加终止液后，在450nm处测其吸光度。然后根据所测血清标本的吸光度求出其KLKl4浓度。以正常对照组的均值±1.9个标准差，即95%可信区间值上限值作为KLKl4阳性标准[2]。

1.3统计学方法 统计学方法采用SPSS 11.0，计量资料比较应用t检验，计数资料应用χ2。以P<0.05为检验水准。

2 结果

2.1kLK14的表达KLK14主要表达卵巢上皮组织细胞的细胞浆，卵巢组织中的KLK14的阳性表达见表1。

2.2卵巢癌KLK14 阳性表达率与临床病理的关系，见表2。

2.3不同卵巢组血清学浓度表达，见表3。

表1 KLK14蛋白在各卵巢组织中表达情况(例，%)

表2 KLKl4蛋白的表达与卵巢癌病理关系(例， %)

表3 卵巢癌、良性上皮卵巢肿瘤、正常妇女血清KLK14的浓度值例)

3 讨论

KLK14 是2012年由Youself GM等利用候选基因位置克隆法定位出的一段序列，是激肽释放酶基因家族成员，位于19q13.3～19q13.4 染色体上，全长6349bp，在激素相关性组织组织中高表达，如乳腺、前列腺、睾丸等器官的肿瘤组织。

目前发现肿瘤侵袭对细胞外基质的降解是一个重要步骤，其中需要多种降解酶，尤其肿瘤细胞分泌的蛋白酶能降解细胞外基质是肿瘤侵润转移的分子基础和先决条件，活化后的KLK14具有双重活性即胰岛素样糜蛋白酶活性，能够有效水解层黏连蛋白5和胶原质IV等细胞外基质，促进肿瘤细胞突破基底膜，穿透细胞外基质，进而促使肿瘤细胞侵袭临近正常组织或转移至远处发生恶性增殖，因而，KLKl4在恶性肿瘤细胞的发生进展中发挥重要作用，原发恶性肿瘤细胞产生分泌的蛋白酶量，从侧面可能反映了肿瘤细胞自身的侵袭与转移能力，检测KLK14蛋白的表达，可能有助于诊断和监测卵巢癌的侵袭与转移[3-5]。

本研究发现，KLK14 主要表达于卵巢上皮组织细胞的细胞浆，正常卵巢，卵巢上皮良性肿瘤及卵巢癌组织中，KLK14 阳性表达率分别为20%(2/10)，20.8%(5/24)，63.4%(25/41)，KLK14在早期卵巢癌(Ⅰ、Ⅱ期)组织中表达阳性率为42.8%(6/14)，低于晚期卵巢癌(Ⅲ、Ⅳ期)组织中表达阳性率70.3%(19/27)；说明随着卵巢癌的临床进展，KLK14表达水平随之升高。本研究同时检测了同期手术正常卵巢，卵巢上皮性良性卵巢肿瘤及卵巢癌患者的血清KLK14 水平，结果卵巢癌组血清KLK14浓度明显升高,血清学上与免疫组化结果一致，均提示KLK14 蛋白与卵巢癌的恶性行为关系密切。有望成为新的肿瘤标记物。

[1] Felber LM， Kundiq C， Borgono CA，et al.Mutant recombinant serpins as highly specific inhibitors ofhuman kallikrein 14.FEBS J,2006,273(11):2505-2514.

[2] Qikonomopotlou K， Hansen KK， Saifeddine M， et al. Kallikrein-mediated cell Signalling:targeting proteinase-activated receptors(PARs). Biol Chem,2006,387(6):817-824.

[3] Borgono CA， Michael IP， Shaw JL，et al.Expression and functional characterization of the cancer-related serine protease，human tissue kallikrein 14. J Biota Chem,2007,26,282(4):2405-2422.

[4] StefanssonK， BrattsandM， NvA， et al. Kallikrein-related peptidasel4 maybea major contributor to trypsin-like proteolytic activity in human stratum comenm. Biol Chem,2006,387(6):761-768.

[5] 史惠蓉，宋芷霜，张瑞涛，等.卵巢上皮性癌组织中人组织激肽释放酶基因14的表达.郑州大学学报(医学版),2011，46(1):25-28.

Kallikrein14inovariancancertissuesanditsclinicalsignificance

YANQiu-mei,LIQiao-yun,WENLi-hong.

ObstetricsandGynecology,TheFifthAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Henan450052,China

ObjectiveTo investigate the effect of kallikrein 14 (kallikreinl4) expression in ovarian carcinoma and its clinical significance.MethodsThe concentration of different ovarian patients with KLK14 protein was detected by SP and ELISA expression and KLK14 serology.ResultsThe expression of ovarian cancer group the positive rate of KLK14 protein in serum concentrations were significantly higher than benign epithelial ovarian tumor and normal ovarian group. The expression of KLKl4 protein in ovarian cancer patients with clinical stages, histological classification,ConclusionOverexpression of KLKl4 and ovarian cancer,invasiveness,suggesting that it may become a marker in ovarian cancer.

Tumor marker; Epithelial ovarian cancer; KLKl4; SP; ELISA

450052 郑州大学第五附属医院妇产科