宁萌,潘亮,谢文利,金鑫
2型糖尿病(T2DM)占糖尿病患者的90%[1],胰岛功能衰退和胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)是其病理生理学基础。目前,T2DM的治疗主要是通过促进β细胞分泌胰岛素或改善靶组织对胰岛素的敏感性进行的,常用药物包括胰岛素及其类似物、磺酰脲类、双胍类、噻唑烷二酮和抗糖尿病中药类等。麦冬为一种常用滋阴中药,药理作用广泛,临床上用于糖尿病辅助治疗效果显著,还可降低糖尿病模型动物的血糖[2]。但文献报道多为复方制剂或粗提物,成分复杂,具体药物成分不清且作用机制不详。本研究选择麦冬的主要成分麦冬多糖(ophiopogonpolysaccharide,OPSR)和麦冬皂苷(ophiopogonin,OPG)为研究对象,以3T3-L1诱导的脂肪细胞建立葡萄糖消耗模型,初步筛选出具有降糖和增加胰岛素敏感性的提取物,观察其对脂肪细胞瘦素、脂联素、抵抗素表达水平的影响,探讨胰岛素增敏相关机制,并应用T2DM模型大鼠进一步验证其治疗效果。
1.1 主要材料 3T3-L1前脂肪细胞由同济大学提供。雄性Wistar大鼠,190±10g,由军事医学科学院动物中心提供,动物合格证号SCXK-(军)-2007-004。OPSR(平均分子量5600,纯度90%)、OPG(纯度90%)由本实验室提取。葡萄糖测定试剂盒购自中生北控生物科技股份有限公司。链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)、胰岛素(insulin,INS)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(3-isobutyl-1-methylxanthine,IBMX)为美国Sigma公司产品。DMEM高糖培养基为美国Invitrogen公司产品,瘦素抗体、脂联素抗体、抵抗素抗体、β-actin抗体为美国Abcam公司产品。
1.2 3T3-L1脂肪细胞的诱导分化及鉴定 参照文献[3]的方法进行。3T3-L1前脂肪细胞用含10%胎牛血清、100U/ml青霉素、0.1mg/ml链霉素的DMEM完全培养液在37℃、5% CO2、饱和……