胰岛素样生长因子-1对小鼠病毒性心肌炎心肌细胞凋亡蛋白p53的表达的影响

湖北医药学院附属太和医院儿科（十堰442000） 顾 坚 李堰松 顾教伟 李敬风

细胞凋亡在病毒性心肌炎（Viral myocarditis，VM）的病程中发挥着重要的作用，而在细胞凋亡过程中，p53蛋白起着至关重要的作用［1］。动物实验及临床研究表明：胰岛素样生长因子-l（IGF-1）可增强心脏功能，抑制心肌细胞凋亡。本组通过研究外源性IGF-1对VMC小鼠心肌的保护作用对临床应用提供依据。

材料与方法

1 动物与试剂 CVB3Nancy株购自湖北省实验动物中心病毒室，病毒原液效价为10-6半数组织培养感染量（TCID50）／ml，Balb／c雄性小鼠60只购自湖北省实验动物中心。4～6周龄；体质量l3～16g。小鼠IGF-1购于深圳达科为生物技术公司，p53抗体、SP免疫组织化学试剂盒购自北京中杉生物技术公司。

2 心肌炎模型的制备和分组 将小鼠随机分为感染组20只，治疗组20只，每只腹腔接种0.1ml／106TCID50／ml的柯萨奇B3病毒（CVB3）稀释液；对照组20只，每只腹腔接种0.1ml不含CVB3的Eagles液。治疗组从接种病毒稀释液当日开始每天予腹腔注射外源性IGF-1［100μɡ／（kg·d）］，连续10d。

3 标本的留取 各组小鼠于治疗后第10天全部断颈处死并留取心脏。心脏标本用40g／L甲醛固定，石蜡包埋，组织切片，待免疫组织化学检测。

4 检测指标 免疫组织化学S-P法检测心肌组织中p53表达：石蜡标本脱蜡，p53采用微波、高压抗原修复，滴加正常动物血清，过夜，滴加一抗为p53兔多克隆抗体（1∶200），4℃过夜，滴加生物素化二抗，滴加链霉亲和素-生物素-过氧化物酶复合物，3，3'-二氨基联苯胺（DAB）显色，苏木素复染，脱水，透明，封片。阳性结果判断：p53阳性表达主要定位于细胞内，呈棕黄色颗粒样。在HPIAS2000型图像（武汉同济千屏影像工程公司）分析仪上，每个切片随机取5个高倍视野，测定一定面积内阳性信号面积和阳性信号平均灰度值乘积，阳性信号指数＝阳性信号面积×阳性信号平均灰度／测定面积×100。……