CCL20抗体对慢性阻塞性肺疾病大鼠外周血和肺泡灌洗液中树突状细胞表面因子表达的影响

顾延会，欧阳瑶，孙得胜（遵义医学院附属医院呼吸一科，贵州 遵义 563003）

慢性阻塞性肺疾病（chronic obstructive pulmonary disease，COPD）是气道慢性非特异性炎症性疾病。研究认为多种细胞因子、趋化因子、蛋白酶和氧化剂等参与COPD炎症过程。CC亚族趋 化 因 子 配 体 20（CC chemokine ligand－20，CCL20）是CC家族的趋化因子，主要表达于炎症组织上皮表面，包括气道上皮。国内外研究报道中均提示树突状细胞（dendritic cells，DCs）参与COPD发病过程，作为DCs最强有力的趋化因子——CCL20亦可能参与了COPD的发病过程，可能是通过影响DCs在气道内的募集而参与该过程。本研究制备CCL20抑制型大鼠模型，研究CCL20和DCs在COPD发病过程中的作用及抗CCL20抗体治疗对外周血和肺泡灌洗液（brochoalveolar lavage fluid，BALF）中 DCs表面因子表达的影响，以期进一步认识CCL20在COPD发病机制中的作用，从而为COPD的治疗提供一个新的思路。

1 材料与方法

1.1 实验动物、材料与仪器 雄性SPF级Wistar大鼠（由重庆第三军医大学大坪医院实验动物中心提供）48只，约8周龄，体质量（200±20）g；脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）及E.coli 055∶B5购自美国Sigma公司；MIP－3α（G－20）购自Santa公司；大鼠巨噬细胞炎性蛋白3α（MIP－3α／CCL20）酶联免疫分析试剂盒由美国B＆D公司生产，上海西塘生物科技有限公司提供；PE anti－rat CD80（B7－1）、 PE Mouse IgG1、k Isotype control、FITC anti－rat CD86（B7－2）、FITC Mouse IgG1、APC anti－rat MHC ClassⅡ及APC Mouse IgG1均购自eBioscience公司；Anti－OX－62Monoclonal Antibody、 Mouse IgG1k Isotype control PE均购自Thermo Science公司；Monoclonal Anti－rat CCL20／MIP－3α Antibody 购自R＆D Systems公司。流式细胞检测仪购自美国B＆D公司。

1.2 动物分组及模型制备 48只 Wistar大鼠饲养于遵义医学院药理学教研室动物房内（符合饲育SPF级实验动物），饲养温度25℃，相对湿度70%，昼夜照明12h／12h。按随机数字表法分为正常对照组（n＝16）、COPD模型组（n＝16）和CCL20抑制组（n＝16）。参考文献［1］制备动物模型，COPD模型组及CCL20抑制组大鼠第1和15天气道内注入LPS溶液0.2mL（200μg／200μL），第2～28天（第15天除外）连续每天被动吸烟2次，30min×12支／次；……