抗体库技术

惠光艳 贾文敏 石桦 周国清 颜晗 单守勤(济南军区青岛第一疗养院，266071)

·综述·

抗体库技术

惠光艳 贾文敏 石桦 周国清 颜晗 单守勤(济南军区青岛第一疗养院，266071)

由于抗体在诊断和治疗等多方面有极其重要的应用，针对各界对抗体的不同需求，目前已发展并完善起一种新的生物学技术——抗体库技术。该技术可同时有效的处理大量抗体分子，不经动物的阴性选择，从任一种属中获得少有的亲和力高、专一性强的抗体。本文将此技术作一介绍。

抗体库；体外成熟；阳性克隆

1989年，Ward等报道[1]了由重链可变区组成的单区抗体库，同年Huse等用PCR法建立了全套抗体、轻链库和全套重链Fd段基因库。他们把所有轻链片段和重链Fd(VH＋CH1)段分别克隆到λZap改造的表达载体中，构成轻重链库，然后将这两个库随机重组形成了组合抗体库。由于在V基因的5'端有分泌信号序列，所表达的Fab可分泌到细菌外。对这种λ噬菌体抗体库组合文库仍采用传统的“膜原位杂交法”筛选特异性抗体，所以对库容量为106～107筛选时其工作量之大是可想而知的。

为了克服随机组合抗体库的随机性强，库容量大，筛选工作量大和不易获得特异性抗体的缺点，1991年将噬菌体表面递呈技术引入抗体库的构建，出现了噬菌体抗体库。

来自人外周血、脾和骨髓淋巴细胞的cDNA，用PCR法扩增出抗体基因，已分泌Fab或ScFv的形式克隆到噬菌粒载体中，构建人源抗体库。

1 抗体库的构建与工程抗体的体外成熟

1.1 抗体库的构建 由于抗体的亲和力和特异性主要由抗体的可变区决定，因而对抗体进行体外成熟时，几乎都是对抗体的可变区进行突变，既可选择对整个抗体可变区进行突变，也可选择对抗体可变区的某一个或某几个小范围区域进行突变。……