骨桥蛋白及CD44v6在肺腺癌侵袭转移中的作用

王安雷，孙冰生，张真发

(天津市肿瘤防治重点实验室、天津市肺癌诊治中心、天津医科大学肿瘤医院，天津300060)

肺腺癌可分为浸润前病变、微浸润腺癌、浸润型腺癌、浸润型腺癌的变异型。原位肺腺癌(AIS)属浸润前病变，直径＜3 cm的非黏液型细支气管肺泡癌定义为AIS，肿瘤细胞仅沿原有的肺泡结构生长(伏壁样生长)，无间质、血管或胸膜浸润，可表现为乳头状或微小乳头状生长模式，而肺泡内肿瘤细胞缺如［1］;伏壁样生长为主型腺癌(LPA)属浸润性腺癌，由AIS进展而来。骨桥蛋白(OPN)是一种分泌性钙结合磷酸化蛋白，通过与其受体整合素、CD44等结合来促进细胞的趋化、黏附和迁移。2012年6月～2013年9月，我们检测了 OPN及其受体CD44v6在肺腺癌细胞系中的表达情况，观察二者对肺腺癌侵袭能力的影响。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择2009年6月～2012年6月在天津医科大学肿瘤医院行手术治疗的原发性肺癌患者129例，男89例、女40例，年龄40～75岁、中位年龄60岁。病理诊断依据肺腺癌国际多学科分类标准［1］，术前均未接受放疗或化疗治疗。其中AIS 36例，LPA 66例，癌旁组织(与原发病灶距离 ＞5 cm)27例。NCI-H358细胞来源于AIS，细胞购自上海复祥生物公司;A549细胞来源于侵袭性腺癌，由天津医科大学表观遗传调控与肿瘤发生实验室提供;PG-BE1细胞来源于肺巨细胞癌高转移亚型，购自上海拜力生物公司。由于OPN在PG-BE1细胞中高表达［2］，因此以PG-BE1细胞培养基上清代替OPN作为趋化因子。三种细胞均用含胎牛血清10%的RPMI1640培养基，置于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养。

1.2 方法

1.2.1 免疫组化检测 取手术切除组织制成石蜡标本，常规二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，高温高压抗原修复，3%H2O2阻断内源性过氧化物酶，正常山羊血清工作液封闭，滴加一抗、二抗，DAB显色，苏木精复染，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，封片。……