健脾解毒方逆转大肠癌细胞多药耐药的作用机制

李先茜，吴嘉熙，范忠泽，孙燕妮，高 虹

(1上海市徐汇区中心医院，上海200031;2上海中医药大学附属普陀医院)

多药耐药(MDR)是指肿瘤细胞对一种化疗药 物产生耐药性后，对从未使用过的、结构和机制不同的多种化疗药物也产生交叉耐药性［1］，是导致化疗效果差的主要原因［2］。MDR与MDR基因MDR-1的过度表达导致肿瘤细胞内MDR-1编码产物P-糖蛋白(P-gp)增多有关［3］，因此通过药物影响MDR-1的表达来消除肿瘤细胞对化疗的耐药性，可增加化疗效果［4］。研究发现，对晚期大肠癌患者加用健脾解毒方后，其化疗效果明显增强。2004年1月～2013年12月，我们观察了健脾解毒方对大肠癌MDR基因表达的影响，检测用药前后肿瘤细胞内信号因子Akt磷酸化的改变，探讨健脾解毒方逆转大肠癌MDR基因的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料 体质量约250 g的SD大鼠20只，大肠癌细胞敏感株(HCT-8)及耐药株(HCT-8/V)购于南京凯基生物科技发展有限公司，PI3K抑制剂LY294002 购自Cell Signaling Technology，Inc(Danvers，MA，USA)，健脾解毒方(由生黄芪、党参等11味中药组成)购于上海中医药大学附属普陀医院中药房，长春新碱(VCR)购自深圳万乐药业有限公司，抗p-Akt抗体购自SANTA公司。

1.2 方法

1.2.1 药物血清配制［3］与细胞培养 将大鼠随机分为药物组和对照组各10只，分别给予健脾解毒方剂和生理盐水连续灌胃5 d，腹主动脉取血，分离血清。药物组血清应用对照组血清分别配制成0%(空白血清)、5%、10%、15%、20% 的药物血清，－20℃保存备用。HCT-8和HCT-8/V细胞加入含10%小牛血清的RPMI1640高糖培养基，置37℃、饱和湿度、5%CO2培养箱中常规培养。当细胞贴壁并覆盖培养皿底80%后，用0.25%胰酶消化，每3～4 d传代1次。……