羧氨基葡聚多糖钠对胃癌脱落细胞种植转移的抑制作用

俞士勇，阎 波，刘兆龙

(1同济大学医学院，上海200331;2上海市浦东新区人民医院)

胃癌是常见的消化道恶性肿瘤，临床发现、手术治疗的胃癌绝大部分为进展期癌。尽管胃癌的规范性根治术能够很大程度清扫淋巴途径的转移，但其5年生存率只能提高到60%左右［1］。进展期胃癌腹腔内脱落细胞种植转移是导致预后不良的重要因素之一［2，3］。胃癌根治术后腹腔内常残留游离癌细胞或残余微小癌灶，腹膜表面的间皮下结缔组织的裸露又为癌细胞的增殖创造了条件，导致术后腹膜播散、复发和转移。研究显示，羧氨基葡聚多糖钠具有抑制胃癌肿瘤细胞生长和促进肿瘤细胞凋亡的作用［4］。2012年8月～2013年7月，我们通过体外试验研究羧氨基葡聚多糖钠对胃癌细胞MGC-803细胞生物学行为的影响。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 人胃癌MGC-803细胞株购自上海中科院细胞所，培养基为DMEM，10%小牛血清培养于37℃、5%CO2培养箱中。羧氨基葡聚多糖钠由山西皮尔复生物技术有限公司提供。Vybrant凋亡检测试剂盒购自Invitrogen公司。

1.2 方法

1.2.1 细胞增殖检测 采用MTT法。将胃癌细胞按(2 ～3)×103/孔铺于96 孔板，实验组为12.5、25、50 mol/L三种浓度羧氨基葡聚多糖钠(以氨基葡萄糖含量计算)处理 0、24、48、72 h，对照组加入生理盐水。检测前4 h加入MTT 5 mg/mL，按10 μL/100 μL培养基，培养4 h;弃培养基，加入150 μL DMSO，37℃孵育10 min，于570 nm波长处测OD值。

1.2.2 细胞周期检测［5］将胃癌细胞按5×105/孔铺于6孔板，分别加入羧氨基葡聚多糖钠12.5、25、50 mol/L 处理 0、24、48、72 h，对照组加入生理盐水。PBS冲洗，70%乙醇固定过夜;PBS冲洗，0.1%Triton打孔20 min;加入RNA酶20 μmol/L反应20 min，PI标记，流式细胞仪检测细胞周期分布情况。……